SN 1196-2003玉米中转基因成分定性PCR检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1196-2003玉米中转基因成分定性PCR检测方法Protocol of the polymerase chain reaction for detectinggenetically modified components in maize2003-03-17 发布2003-09-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 ETVSN/T 1196—200311前言1本标准的附录A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本标准主要起草人：曹际娟、陈明生、卢行安、赵昕、王秀芬。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T 1196—2003玉米中转基因成分定性 PCR检测方法1 范围本标准规定了玉米中转基因成分检验的抽样、制样、PCR 检测方法。本标准的筛选检测适用于玉米中转基因成分的定性检测。本标准的鉴定检测适用于玉米MON810、Bt11、Event176、T14/T25、CBH351、GA21品系转基因成分的定性检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法SN/T 1193基因检验实验室技术要求SN/T1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法SN/T1204植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法3术语、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本标准。3. 1转基因transgene将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列，通过各种导入手段，使其在该物种中进行表达，以便该物种获得新的品种特征。3. 2聚合酶链式反应polymerase chain reaction，简称 PCR模板基因序列先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的两条引物分别与模板 DNA两条链上相应的一段互补序列发生退火而相互结含，接着在DNA聚合酶的作用下以四种脱氧核糖核酸(dNTP)为底物，使引物得以延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这一循环，使欲扩增的基因片段以几何倍数扩增。3.3缩略语3. 3. 1 PCR:polymerase chain reaction,简称 PCR.3.3.2 DNA;deoxyribonucleic acid,脱氧核糖核酸。3.3.3 dNTP:deoxyribonucleoside triphosphate,脱氧核苷三磷酸。3.3. 4 dATP;deoxyadeNOSine triphosphate,脱氧腺苷三磷酸。3.3.5 dCTP;deoxycytidine triphosphate,脱氧胞苷三磷酸。3.3.6 dGTP:deoxyguaNOSine triphosphate,脱氧鸟苷三磷酸。3.3.7 dTTP:deoxythymidine triphosphate,脱氧胸苷三磷酸。3. 3. 8 dUTP:deoxyuridine triphosphate,脱氧尿苷三磷酸。 SN/T 1196-20033. 3. 9 bp:base pair,碱基对。3.3. 10 EDTA: ethylene diaminetetraacetic acid,乙二胺四乙酸。3.3. 11 Taq:Thermus aquaticu,水生热栖菌。3.3.12 Tris:tris(hydroxymethyl)aminomethane,三(羟甲基)氨基甲烷。3.3.13TE:Tris-C1、EDTA缓冲液。3.3. 14 IVR:invertase 1 gene from maize,玉米的转化酶 1 基因。3.3.15Zein:玉米醇溶蛋白基因。3.3.16CaMV 35S:35S promoter from cauliflower mosaic virus，来自于花椰菜花叶病毒的 35S启动子。NPTII；neomycin-3-phosphotransferase gene,新霍索-3-磷酸转移酶基因。3. 3. 173.3.18NOS：terminator of nopaline synthase gene,胭脂碱含成酶基因终止子。3. 3. 19 IVS2:intron from the maize alcohol dehydrogenase gcne,玉米醇脱氢酶基因的基肉内区 2。3.3.20 PAT： phosphinothricin acetyltr