石蜡切片操作过程及所用试剂一览.pdfVIP

石蜡切片操作过程及所用试剂一览 1.器具石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸 水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。2.试剂 10%番红水溶液、0.5%固绿(用95%的 酒精配制)、酒精(100%、95%、80%、70%、50%)、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性 树胶等。三、实验材料幼嫩植物各部分，根据季节选择材料。四、实验内容与 方法石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。它是把材料封埋在 石蜡里面，用旋转切片机切片，可以切出很薄的切片。凡是精细的工结构，大 都用石蜡切片。全都过程如下：1.固定2.洗涤3.脱水与硬化4.脱酒精2.封埋 6.切片 7.粘片8.脱蜡9.染色 10.脱水 11.透明 12.胶封(一)固定1.固定的意义： 固定就是用药品把细胞杀死，使细胞的原生质凝固，死后不发生变化，尽可能 保持原来的结构以供我们观察。良好的固定剂，应是穿透力强，使细胞立刻致 死，原生质全部凝固；不发生任何变形，增强折光率，并且不妨碍染色。2.固 定液的种类：固定液的种类很多，根据配制成分可划分为：(1)简单固定液：以 一种化学药品配制的固定液。常用的简单固定液有：A.酒精即乙醇，用作固定 液，常用纯酒精或95%酒精。酒精穿透力强，固定时间常在1 小时以内。高浓 度酒精有使材料收缩的作用。70%的酒精可作保存液。配制低度酒精必需要用普 通酒精即95%的酒精，绝不可用纯酒精。酒精为还原剂，不能与铬酸、锇酸、 重铬酸钾等氧化剂配合。酒精可使核酸，蛋白质及肝醣等发生沉淀，但能溶解 脂肪及拟脂。B.福尔马林即甲醛，具强烈刺激性的气味，纯净的甲醛，为无色 透明液体。固定用的浓度为4-10%甲醛也是强还原剂。不能与铬酸、锇酸等氧 化剂配合。经固定后，材料变硬，通常不引起皱缩，但随后经过他种药剂处理 时，就每每出现皱缩。所以甲醛一般不单独作固定，而与其他液体混合使用。C. 醋酸：为无色透明的液体，刺激性极强，冷则凝结成冰，故又叫冰醋酸。醋酸 以与水和酒精配成各种比例的溶液，所用浓度为0.2~5%，也常与其他固定剂配 合使用。醋酸穿透性很强，单独使用，有使原生质膨胀的作用，故常与酒精， 甲醛等合用，醋酸为固定染色体的优良固定液，因此固定染色体的固定液中， 几乎都含有醋酸。(2)混合固定液：由几种药剂，适量配制而成。常用的有下列 几种：A、F.A.A 固定液(又称万能固定液)：[用途]这个固定液在植物研究上， 应用最多，为植物组织最常用的固定液。固定时间，不受限制，短为24 小时， 长可延至数月或数年。野外工作，非常便利。并且固定的材料，不妨碍染色， 但对染色体的固定不佳。材料固定后，用50%酒精洗涤数次。[配法]50%或70% 酒精90 毫升冰醋酸5 毫升福尔马林5 毫升柔软材料用50%酒精，坚硬材料用70% 酒精配制。B、卡尔诺氏(Carnoys)固定液[用途]此液作组织细胞的固定，有极 快的渗透力，固定根尖和花药只需40-60 分钟。固定后用95%酒精冲洗，在组 织不能立即处理时，需转入70%酒精中保存。配法有两种：C.纳瓦兴 (Navaschjns)固定液[用途]此液在植物制片上应用甚广，是细胞学及组织学上 一种优良的固定液。此液原来的配方已很少应用，现所用的都是改良液，且种 类很多，如材料较柔嫩，含水量较多，可用配方I、Ⅱ；材料较坚硬，含水量 较少，可用Ⅳ、V 配方，其中配方Ⅱ对植物胚胎学制片特别适用。为了使用方 便，常分别配成甲、乙两种基液，用时临时等量配合。固定时间为 12-24 小时， 固定后用70%酒精洗涤数次。(二)洗涤材料固定后，药剂继续留在组织中，易 使组织破坏，必须用水或酒精洗去。用什么去洗，可根据三条原则：1.凡用水 溶液配制的固定液，特别是含有铬酸、重铬酸钾的固定液，一律用水洗。2.凡 用酒精配制的固定液，一律用同浓度的酒清洗。3.如固定液中含有苦味酸.在 70%酒清中停留稍久时，可除去黄色。如用升汞固定的材料，在洗涤时，须加碘 液，可除去汞的结晶。(三)脱水与硬化材料洗涤后，其中含水，水与石蜡不能 混合，必须洗去。去水用酒精，材料由水入酒精中，不能操之过急，须由低度 酒精渐至高度酒精。通常由30%、50%、70%、80%、90%，每次须经半小时，材 料大的，时间须延长。若暂时不能埋蜡、材料可放在70%酒精中保存，经久不 坏。在高度酒精中，不能过久.因酒精能使材料硬化，过久则材料由硬而脆，切 时易于粉碎。(四)脱酒精材料脱水后，材料中全含酒精，酒精与蜡也不能混合， 仍须除去。脱酒精通常用二甲苯，材料由酒精入二甲苯，最好也渐次进行，先 经纯酒精二甲苯混合液，再入纯二甲苯中，纯二甲苯