SN_T 5099-2019国境口岸亨德拉病毒实时荧光RT-PCR检测方法.pdf

ICS 11.020C 62SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 5099—2019国境口岸亨德拉病毒实时荧光RT-PCR 检测方法Detection method for Hendra virus by real-time fluorescenceRT-PCR at frontier ports2019-09-03 发布2020-03-01实施海中西海国出版社有限公司HG944440008393中华人民共和国海关总署发布数活网址：wh.刮开涂层激活密码 SN/T 5099--2019前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、新疆国际旅行卫生保健中心、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民共和国广州海关本标准主要起草人：马雪征、杨烨、林燕如、张丽萍、胡孔新、史蕾、孙肖红。 SN/T 5099—2019国境口岸亨德拉病毒实时荧光RT-PCR 检测方法1 范围本标准规定了国境口岸亨德拉病毒检测的生物安全要求，标本的采集、运输和保存,标本的处理，实时荧光RT-PCR检测方法。本标准适用于国境口岸人出境人员携带亨德拉病毒的核酸检测。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求WS/T 230临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用WS233病原微生物实验室生物安全通用准则可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒)种或样本运输管理规定（原中华人民共和国卫生部令第45号)人间传染的病原微生物菌(毒)种保藏机构管理办法（原中华人民共和国卫生部令第68号）卫科教发【2006]15号）人间传染的病原微生物名录（原中华人民共和国卫生部3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1亨德拉病毒Hendra virus,HeV属于亨德拉尼帕属（Henipauirus），是副粘病毒科（Paramycoviridae）的-一个新病毒类别。注：亨德拉病毒是一种人畜共患病病毒，于1994 年在澳大利亚昆士兰州布里斯班郊区的亨德拉首次被发现,能引起严重的呼吸道疾病。到目前为止，HeV感染的人类病例均是与感染马匹有密切接触的人，因此密切接触是 HeV的传播途径之一。HeV病毒造成的疾病的典型特征是严重的呼吸困难和高死亡率，表现为人接触性感染。人感染后，发病初期有显著的呼吸道症状，伴有发热和肌痛；有的出现神经症状，常表现为中度脑炎。3.2Ct 值 cycle threshold是每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。4缩略语下列缩略语适用于本文件。BHQ1:黑洞淬灭基团(black hole quencher1)DEPC:焦碳酸乙二酯(diethyl pyrocarbonate) SN/T 5099-2019FAM:6-羧基-荧光素(6-carboxy-fluorescein)5 检测对象出入境口岸发现的可疑病例。6实验室生物安全和 PCR防污染要求6.1实验室生物安全6.1.1亨德拉病毒危害程度分类为第类。6.1.2个人防护应遵循GB 19489。6.1.3实验室应遵循GB19489和WS233,未经培养的感染性材料的操作应在生物安全Ⅲ级（BSL-3或 ABSL-3)实验室内进行，灭活材料在生物安全I级(BSL-2)实验室内进行。6.1.4亨德拉病毒感染性材料运输包装分类为A类，UN编号为UN2814。6.1.5使用过的实验用品应遵照GB19489对废弃物的处理要求进行无害化处理。6.1.6疑似亨德拉病毒材料的包装及转运应符合《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》。6.2PCR防污染要求按照WS/T230的规定执行。7仪器7.1实时荧光PCR仪。7.2超净工作台。7.3二级生物安全柜。7.4高压灭菌锅。7.5低温高速离心机：最大离心力20000g。7.6涡旋振荡器。7.7 冰箱:4 ℃、-20 ℃和-70 ℃。7.8移液器:10 μL、20 μL、100 μL、200 μL 和 1 mL。7.9恒温水浴锅。7.10无菌注射器。18 试剂8.1核酸提取试剂:用德国Oiagen 公司QIAamp Viral RNA Kit 提取病毒核酸。8.2实时荧光 RT-PCR试剂:Ag-Path-IDTM One Step RT-PCR Kit,美国 Ambion 公司产品1)8.3 无RNA 酶的DEPC水。1）由指定单位提供，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。2 SN/T 5099—20198