NY_T 1799-2009菜籽饼粕及其饲料中噁唑烷硫酮的测定 紫外分光光度法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1799—2009菜籽饼粕及其饲料中噁唑烷硫酮的测定紫外分光光度法Determination of oxazolidinethione in rapeseed meal and feedSpectrometric method2009-12-22 发布2010-02-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 1799—2009前言言本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：李培武、丁小霞、汪雪芳、周海燕、张文、谢立华。I NY/T 1799—2009菜籽饼粕及其饲料中嗯唑烷硫酮的测定紫外分光光度法1范围本标准规定了采用紫外分光光度法测定菜籽饼粕及其饲料中嗯唑烷硫酮的方法。本标准适用于菜籽饼粕及其饲料中嗯唑烷硫酮的测定。本标准方法的检出限为：0.15mg/g。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T10360油料饼粮扦样法3原理菜籽饼粕及其饲料中硫代葡萄糖苷在pH7.0缓冲溶液中，在芥子酶作用下，水解生成异硫氰酸酯，其中带羟基的异硫氰酸酯在乙醇中可环化形成嗯唑烷硫酮，用紫外分光光度计测定。4试剂除非另有说明，均使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的二级水。4.1无水乙醇(C,H,OH)。4. 22二氯甲烷(CHzCl2）。4.3柠檬酸(CHgO·H2O)。4.4 磷酸氢二钠(Na²HPO· 2H2O)。4.5氢氧化钠(NaOH)。4.6石油醚（沸程30℃～60℃）。4.70.1mol/L柠檬酸溶液：准确称取20.1g柠檬酸溶解于水中，定容至1L，现用现配。4.80.2mol/L磷酸氢二钠溶液：准确称取35.6g磷酸氢二钠溶解于水中，定容至1L。4.90.01mol/L氢氧化钠溶液：准确称取0.400g氢氧化钠溶解于水中，定容至1L。4.10pH7.0缓冲溶液：取35mL0.1mol/L柠檬酸溶液（4.7）于250mL容量瓶中，加人200mL0.2mol/L磷酸氢二钠溶液（4.8），并用0.01mol/L盐酸溶液或0.01mol/L氢氧化钠溶液调整pH至7.0。4.11粗芥子酶：取白芥种子（72h内发芽率应大于85%，保存期不应超过2年）粉碎，使80%能过60目筛，用石油醚（4.6)提取其中脂肪，在通风橱中用微风吹去残留的石油醚。此酶置于具塞玻璃瓶中4℃下保存。可在一个月内使用。5仪器设备5.1分析天平，感量0.0001g。1 NY/T 1799—20095.2粉碎机。5.3旋涡混合器。5.4离心机，4000 r/min。5.5恒温水浴，50℃。5.6紫外分光光度计，备有10mm石英比色皿。5.7100uL微量进样器。5.810mL具塞试管。5.910mL离心管。6试样制备按GB/T10360扦样、分样，缩分至50g，去杂，粉碎，使80%能通过60目筛，装入样品瓶中备用。7分析步骤准确称取预先干燥至恒重的试样0.2g（精确到0.1mg）于离心管中，加40mg粗芥子酶（4.11），加2.0mL缓冲溶液（4.10），旋涡混合。35℃条件下酶促反应2h。加2.5mL二氯甲烷（4.2），旋涡混合，在室温下振荡0.5h。旋涡混合，4000r/min离心20min。取6mL无水乙醇（4.1）于具塞试管，用微量进样器取离心管下层有机相50μL，加入到装有无水乙醇的具塞试管中，盖上塞。旋涡混合均匀，将具塞试管放人水浴锅，50℃下加热反应0.5h，取出，冷却至室温。同时做空白试验。8仪器分析将提取液倒入10mm比色Ⅲ中，在235nm、245nm和255nm处测定。先测定空白对照，去除本底，再测定样品，读取试料提取液的吸光值。9结果计算试料中嗯唑烷硫酮的含量（）以每克干样中嗯唑烷硫酮的毫克数（mg/g)表示，按式(1)计算：A235 A255) × 4. 42(1)WA22m式中：试样235nm处吸光值；A235—A245—试样245nm处吸光值；A255——试样255nm处吸光值；m-样品称样量，单位为克(g);4.42——换算系数，单位为毫克(mg）。每个试样平行测定两次，计算算术平均值，结果保留两位小数。10精密度10.1重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。10.2再现性在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的15%