SN_T 3949-2014塑料包装 有害物质双酚A的检测方法 抗原抗体结合法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3949—2014塑料包装有害物质双酚A的检测方法抗原抗体结合法Plastic packageDetermination of harmful material bisphenol A-Conjuction of antigen and antibody method2014-11-01实施2014-04-09 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局利涂窗 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准塑料包装有害物质双酚A的检测方法抗原抗体结合法SN/T 3949—2014*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100045)总编室：（010址 中国标准出版社皇岛印刷厂印刷*开本 880×1230 1/16印张 0.5字数 7 千字-2014年12月第一版2014年12月第一次印刷印数1—1300*书号：155066·2-27618 SN/T 3949—2014前言本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、上海近岸科技有限公司。本标准主要起草人：缪文彬、周辉、陈相、冉晓园、陶海华、张晓蓉、蔡丽君、朱洪坤、蒋伟、李蔚、郑华、蔡晓峰、朱化星。I SN/T 3949—2014塑料包装有害物质双酚A的检测方法抗原抗体结合法1范围本标准规定了塑料包装双酚A的抗原抗体结合测定方法的试剂和材料、仪器、试验步骤和结果计算。本标准适用于塑料包装双酚 A的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法原理塑料经过超声提取后获得的滤液用于后续的检测。在酶标板上固定一定量的双酚A偶联抗原，加人样本溶液或双酚A标准品溶液后，接着加人一定量的双酚A特异性抗体，使待测抗原和固定抗原竞争性地与溶液中游离的双酚A特异性抗体结合，充分洗涤未反应的抗体和抗原，再加人一定量的酶标二抗(抗抗体)进行放大作用，充分洗涤后，加底物显色液显色。结果如待测抗原含量越多，与固相抗体结合的抗体越少，酶标二抗的量就越少，显色越浅，两者呈负相关。此实验的条件是：固定抗原限量，抗体定量，酶标二抗限量。固定抗原与待测抗原和抗体结合的位点相同，竞争性地与抗体结合。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯。实验用水应符合GB/T6682中级水的规格。双酚A标准品（色谱纯，99%以上）。.4.14.2甲醇。4.3牛血清蛋白。4.4碳酸氢钠。4.5 碳酸钠。4.6吐温20。4.7磷酸氢二钠十二水合物。4.8 磷酸二氢钾。4.9氯化钾。4.10氯化钠。4.11柠檬酸。4.12醋酸钠。4.13甘油。1 SN/T 3949—20144.14乙二胺四乙酸二钠。4.15四甲基联苯胺。4.16二甲基亚。4.17甲苯。4.18，硫酸。4.19930%双氧水。4.20双酚 A标准水溶液(0.2 μg/L,1.0 μg/L,3.0 μg/L,10.0 μg/L,20.0 μg/L):准确称取 50.0 mg 双酚A粉末，用蒸馏水溶解，以蒸馏水定容至50mL。之后配成双酚A质量浓度分别为0.2μg/L，1.0 μg/L,3.0 μg/L,10.0 μg/L,20.0 μg/L的标准溶液。4.21酶标二抗:HRP标记的羊抗兔 IgG。4.22包被抗原双酚 A-BSA(5.65 mg/mL)。4.23双酚A多克隆抗体。4.24包被液（pH=9.6）:0.05 mol/L碳酸盐缓冲液(Carbonate Buffer Saline,CBS)，4 ℃保存。准确称取碳酸钠1.59g；碳酸氢钠2.93g，溶于800mL蒸馏水中，加热搅拌，待全部溶解后，加蒸馏水至1 000 mL。4.25PBS稀释液:磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer Saline,PBS），4℃保存。准确称取氯化钠8 g;氯化钾0.2g;磷酸二氢钾KHzPO40.24g;磷酸氢二钠十二水合物NazHPO4·12H²O2.9g,溶于800mL蒸馏水中，加热搅拌，待全部溶解后，加蒸馏水至1000mL。4.26洗涤液:1000 mL PBS稀释液加 0.5 mL Tween-20。4.27封闭液：准确称取10.0mg牛血清白蛋白，用10mLPBS稀释液溶解，尽量不要起泡4.28底物显色液A:醋酸钠13.6 g,柠檬酸1.6 g,30%双氧水 0.3mL,溶于 400mL蒸馏水中,待全部溶解后，加蒸馏水至500mL，4℃避光保存。4.29底物显色