NYT 1463-2007饲料中安眠酮的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1463-2007饲料中安眠酮的测定高效液相色谱法Determination of methaqualone in feedsby high-performance liquid chromatography2007-12-18 发布2008-03-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/ T 1463—2007前言本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（济南）、农业部饲料质量监督检验测试中心(西安)。本标准主要起草人：汤文利、任爱丽、梁萌、徐强、陈淑沂、忽桂香。I NY/T 1463-—2007饲料中安眠酮的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了用高效液相色谱仪(HPLC)测定饲料中安眠酮的检测方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料的检测。方法的定量限为 1.5mg/kg，检测限为 0.5 mg/ kg。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3原理在碱性条件下,用三氯甲烷和异丙醇的混合溶液将饲料中的安眠酮提取出来,将提取液蒸至近干，用甲醇溶解残渣,在 HPLC上分离、测定。4 试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。水符合GB/T 6682中一级水和三级水的规定。一般化学分析用三级水，,高效液相色谱分析用一级水。4.1 乙:色谱纯。4.2甲醇:色谱纯。4.3碳酸钠饱和溶液。4.4氯化钠。4.5提取液:异丙醇十三氯甲烷=1十3。4.6乙酸铵溶液：c(CH;COONH）=25mmol/L,准确称取 1.927g乙酸铵于1000mL容量瓶中,用-级水溶解、定容,用Φ0.45um 的水相微孔滤膜过滤。4.7HPLC流动相：乙腈（4.1)十乙酸铵溶液（4.6)30+70,用前超声脱气5min。4.8安眠酮标准贮备溶液(100μg/mL):准确称取 10.1 mg 安眠酮标准品(≥99.0%)于 100 mL容量瓶中,用甲醇(4.2)溶解、定容。置于4℃冰箱中保存,有效期1个月。4.9安眠酮标准工作溶液：分别准确移取安眠酮标准贮备溶液（4.8)1.00 mL、3.00 mL、5.00mL于100mL容量瓶中,1.00 mL、2.00mL、3.00mL、5.00mL于10mL容量瓶中,用甲醇稀释、定容,配制成标准工作溶液，质量浓度分别为 1.00 mg/L、3.00mg/L、5.00 mg/L、10.00 mg/L、20.00 mg/ L、30.00mg/L、50.00 mg/L。现用现配。5仪器5.1实验室用样品粉碎机。5.2分析天平:感量0.1 mg。1 NY/T 1463-—20075.3 离心机：4 360×g。5.4超纯水器。5.5超声波清洗器。5.6 旋涡混合器。5.7带盖塑料离心管：100mL。5.8旋转蒸发仪。5.9高效液相色谱仪，由下述部件组成：5.9.1 泵,无脉冲,能将流速保持在 0.1mL/min～2.0 mL/min。5. 9.2 进样系统,进样环体积 20 μL～50 μL。5.9.3紫外检测器,适合在波长 226 nm 测定。如可能可使用二极管阵列检测器,其还能用于安眠酮的确证。5.9.4工作站。5.9.5保护柱：柱长12.5mm，内径4.6mm，填有粒度为5μm的C18键合硅胶或质量相当的其他保护柱。5.9.63分析柱：柱长250mm,内径4.6 mm,填有粒度为5μm的 C1s键合硅胶柱或性能相当的其他分析柱。分析柱的性能应确保以下条件：安眠酮的容量因子 K≥1。注：容量因子按式(1)计算：K-tR(1)式中:K——容量因子;tr-—-安眠酮的保留时间，单位为分钟(min);t一一不保留成分的保留时间，单位为分钟(min）。6试样的制备按GB/T14699.1的规定进行采样。选取具有代表性的实验室样品1000g，用四分法缩减分取200g左右，粉碎过0.45mm孔径的筛,充分混匀，装人磨口瓶中备用。7 分析步骤7.1 提取称取约2g试料,精确到0.1mg,放人离心管(5.7)中,加人氯化钠(4.4)2g,加人15mL三级水，用碳酸钠饱和溶液(4.3)调pH至10～11。加入20mL提取液（4.5），轻摇数秒；加盖密封，旋涡（5.6)混匀数秒，放气；旋涡混匀30s两次；离心机(5.3)离心5min；吸取下层溶液于具塞试管中。再加