SNT 2497.7-2010进出口危险化学品安全试验方法 第7部分：小鼠耳肿胀试验.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2497.7-2010进出口危险化学品安全试验方法第7.部分：小鼠耳肿胀试验Test method of import and export dangerous chemicals-Part 7 : Mice ear swelling2010-03-02发布2010-09-16 实施中华人民共和国发布拨0系1惑查询真代国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2497.7—2010前 創言SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验;第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；第3部分：大型遥繁殖试验；第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第5部分：睾丸细胞UDS试验；第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；-第7部分：小鼠耳肿胀试验；第8部分：脑窝淋巴结试验；第9部分：血清溶血素测定试验;第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；-第11部分：种系突变试验；第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验;第13部分：荧光原位杂交试验；第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第15部分：PCR-SSCP实验；第 16 部分：Western-Blot 实验;第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；第18部分：DNA加合物的检测方法；第19部分：Northern Blot 实验；第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21 部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第22部分:DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法；第25部分：体液免疫功能试验；第26部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测凋亡；第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第29部分：生化需氧量(BOD)测定。本部分为SN/T 2497的第7部分。本部分修改采用《毒理学实验方法与技术》中的免疫毒理学研究方法，其有关技术内容与上述方法完全一致,在标准文本格式上按GB/T1.1一2000 做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：李宁涛、王利兵、于艳军、陈庆俊、徐斌、李学洋。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。I SN/T 2497.7--2010进出口危险化学品安全试验方法第7部分：小鼠耳肿胀试验1范围SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中小鼠耳肿胀试验的术语和定义、试验原理、试验方法和试验结果。本部分适用于进出口危险化学品安全试验中的小鼠耳肿胀试验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T2497的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。实验动物配合饲料通用质量标准GB 14924.13试验原理二硝基氟苯是一种半抗原,将其稀释液涂抹小鼠腹部皮肤后，与皮肤蛋白结合成完全抗原，刺激 T细胞增殖成致敏淋巴细胞。（4～7)d后再将其涂抹手小鼠耳部皮肤，使局部产生迟发型超敏反应，于抗原攻击后（24～28)h，测定耳部肿胀度，以反应迟发型皮肤超敏反应的强度。4试验方法4.1试验动物选取(6～8)周龄小鼠，试验前；实验动物富含维生素 A的饲料喂养 4 周。实验动物和动物试验的环境设施符合GB14924.1的相关规定。4.2试剂和耗材4.2.1阳性对照：二硝基氟苯溶液。4.2.2注射器、天平、胶布、打孔器4.3剂量和分组取体重(18～22)g小鼠50 只，随机分为5组,每组 10 只，雌雄各半。分别设阴性对照组、阳性对照组及染毒组(低、中、高剂量组）。阳性对照组用二硝基氟苯(DNFB)。4.4试验步骤4.4.1二硝基氟苯溶液配制1%的DNFB溶液应新鲜配制，称取 DNFB50mg，置于清洁干燥的青霉素小瓶中,将预先配制好的5 mL丙酮麻油溶液倒人小瓶，盖好并用胶布密封，混匀后，用250μL注射器通过瓶盖取用。4.4.2致敏试验前24 h于小鼠背部，用剃须刀进行脱毛。试验第1天和第2天在小鼠背部脱毛区涂抹待检化学物 100 μL。第 6天将 40 μL受试物敷在小鼠左耳,右耳敷溶剂。激发后 24 h 和 48 h,颈椎脱白处死小鼠,剪下左右耳壳，用打孔器取下直径8 mm的耳片,称重。以左右耳重量之差为肿胀度。1 SN/T 2497.7—20105试验结果试验结果可以用双侧耳朵厚度的差值(mm)来表示或用耳肿胀程度（%)来表示。耳肿胀(%）（实验耳厚度/对照耳厚度)