SN 1199-2003棉花中转基因成分定性PCR检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1199—2003棉花中转基因成分定性PCR检测方法Protocol of the polymerase chain reaction for detectinggenetically modified components in cotton2003-03-17 发布2003-09-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1199--2003前言本标准的附录 A 为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标推主要起草人：郑文杰、刘炬、唐丹舟、杨绍勇、何霖。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T 1199—2003棉花中转基因成分定性PCR检测方法1范围本标推规定了抗鳞翅目昆虫棉花中转基因成分的定性PCR检测方法。本标准适用于抗鳞翅目昆虫棉花 SGK321、SGK9708、GK1、GK2、GK3、GK5、GK12、GK19、GK22、GK95-1(晋棉 26 号）、Bollgard(保铃棉)中转基因成分的定性 PCR检测。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法SN/T 1193基因分析检测实验室技术要求SN/T 1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法SN/T 1204植物及其加工产品中转基因成分实时荧光 PCR 定性检验方法3术语、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本标准。3. 1转基因transgene将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能 DNA序列,通过各种导人手段，使其在该物种中进行表达，以便该物种获得新的品种特征。3. 2聚合酶链式反应polymerase chain reaction (PCR)模板基因序列先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的两条引物分别与模板 DNA 两条链上相应的一段互补序列发生退火而相互结合,接着在 DNA聚合酶的作用下以四种脱氧核糖核酸(dNTP)为底物，使引物得以延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这循环，使欲扩增的基因片段以几何倍数扩增。→3.3缩略语3. 3. 1 PCR:polymerase chain reaction,聚合酶链式反应,简称 PCR。3. 3.2 DNA;deoxyribonucleic acid,脱氧核糖核酸。3. 3. 3 dNTP:deoxyribonucleoside triphosphate,脱氧核苷三磷酸。3.3. 4 dATP:deoxyadenosine triphosphate,脱氧腺苷三磷酸。3. 3.5 dCTP:deoxycytidine triphosphate,脱氧胞苷三磷酸。3. 3. 6 dGTP:deoxyguanosine triphosphate,脱氧鸟苷三磷酸。3.3.7 dTTP:deoxythymidine triphosphate,脱氧胸苷三磷酸。 SN/T 1199—20033.3. 8 dUTP:deoxyuridine triphosphate,脱氧尿苷三磷酸。3. 3. 9 bp:base pair,碱基对。EDTA. ethylene diaminetetraacetic acid,乙二胺四乙酸。3.3.101Taq: Thermus aquaticu,水生热栖菌。3.3. 113. 3. 12 Tris: tris(hydroxymethyl)aminomethane,三(羟甲基)氨基甲烷。3. 3. 13TE: Tris-C1、EDTA 缓冲液。3.3.14 CaMV35S:35S promoter from cauliflower mosaic virus,花椰菜花叶病毒 35S 启动子。3.3. 15NPTII;neomycin-3-phosphotransferase gene,新霉素-3-磷酸转移酶基因。3. 3. 16 NOS:terminator of nopaline synthase gene,胭脂碱合成酶基因终止子。3. 3. 17 CrylIA(b)-Cry IA(c):a synthetic gene encodes 608 amino acids,insecticidal-active truncatedproduct identical to that of cryIA(b) gene and cry