SN_T 4783-2017出口食品中低聚三果糖、低聚四果糖、低聚五果糖的测定 高效液相色谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4783—2017出口食品中低聚三果糖、低聚四果糖、低聚五果糖的测定高效液相色谱法Determination of kestose,nistose and fructofuranosylnystose in export food-High performance liquid chromatography method2017-05-12发布2017-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T4783—2017前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、国际检验检疫标准与技术法规研究中心、中华人民共和国天津出人境检验检疫局、华南农业大学。本标准主要起草人：韦晓群、郑璇、宋志刚、娄婷婷、杜斯航、吴志航、张玉文、黄维龙、陈文锐、刘青易蓉、王志元、梁瑞婷、卢珍珠一 SN/T4783—2017出口食品中低聚三果糖、低聚四果糖低聚五果糖的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了婴幼儿配方米粉、米乳粉以及奶粉中低聚燕果二糖、四糖、五糖等3种低聚果糖的测定方法，本标准适用于婴幼儿配方米粉、米乳粉以及奶粉中低聚蔗果三糖、四糖、五糖的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要应用既定pH的乙酸水和甲醇溶液沉淀去除蛋自和淀粉后，样品中的低聚果糖再用β-半乳糖酶处理去除半乳糖和乳糖，过膜上机测试，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水采用GB/T6682规定的二级水。4.1甲醇(CH,O)，分析纯。4.2乙酸（C²H,O2），分析纯。4.3乙腈C2HN)，色谱纯。4.4磷酸氢二钠（NazHPO4），分析纯。4.5柠檬酸（CHO），分析纯。4.6低聚果糖标准品：蔗果三糖（C18H32O16，CASNo.：470-69-9），蔗果四糖（C24H42O21，CASNo.：13133-07-8），蔗果五糖（C3H52O26，CASNo.：59432-60-9)3种标准品，纯度≥99%。4.7蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖混合标准储备液溶液：分别称取蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的标准品2.5g，一起用水溶解并定容于50mL容量瓶，配成浓度分别为50000mg/mL的蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖混合标准溶液，2℃～4℃保存，有效期为3个月。4.8蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖混合标准中间溶液：分别准确量取50000mg/mL的单标溶液（4.7）5.0mL，用水定容到25mL，配成浓度分别为10000mg/mL的蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖混合标准溶液。4.9蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖标准混合工作溶液：分别移取10000mg/mL蔗果三糖、四糖、五糖标准中间溶液（4.8）5mL、2.5mL、1mL、0.5mL、0.1mL，用纯水定容至10mL配成5000mg/mL、2500mg/mL、1000mg/mL、500mg/mL、100mg/mL的标准工作溶液，4℃保存，可使用3个月4.10pH为5.0的1mol/L磷酸氢二钠缓冲液：先称取1.92g柠檬酸溶解于10mL纯水中，制得1 SN/T4783—20171mol/L的柠檬酸溶液10mL;称取0.71g磷酸氢二钠溶解与48mL纯水中，然后应用1mol/L的柠檬酸溶液调节磷酸氢二钠溶液pH至5.0，最后定容至50mL。4.1120U/mLβ-半乳糖苷酶溶液：称取103U/mg的β-半乳糖苷酶固体2mg，溶解在10.3mL的缓冲溶液（4.10）中，2℃～4℃保存，可使用1个月。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪，配蒸发光散射检测器和柱恒温系统。5.2流动相真空抽滤脱气装置及0.2um或0.45μm微孔膜5.33色谱柱：改性酰胺柱或者氨基柱，5μm，250mm×4.6mm（内径）或性能类似的分析柱。5.4分析天平：感量为0.01mg和0.001g各一台。5.55离心机：转速10000r/min。5.6涡旋混合器。5.7旋转蒸发器。5.8恒温振荡水槽。6测定步骤6.1提取6.1.1纯奶粉样品称取0.25g样品于50mL离心管中，加人4.73mL水，加人0.07mL醋酸溶液调节pH至4~5之间，溶解振荡5min，10000r/min离心5min，用定量滤纸过滤，加人0.2mL半乳糖苷酶，于45℃下（是在恒温振荡水槽中）酶解3h，酶解后取1mL过0.22um滤膜于进样瓶中，供上机分析。6.1.2纯淀粉食品称取0.25g样品于50mL离心管中，加人