WS 121-1999血清载脂蛋白AI及载脂蛋白B免疫透射比浊测定法.pdf

C50wS中华人民共和国卫生行业标准WS/T 121 ~- 1999血清载脂蛋白 A1 及载脂蛋白 B免疫透射比浊测定法Guidelines for the immuno-turbidimetric determinationof serum apolipoprotein A, and apolipoprotein B1999-12-09 发布2000-05-01实施中华人民共和国卫生部‧发布 中华人民共和国卫生行业标准血清载脂蛋白 A1 及载脂蛋白 B免疫透射比浊测定法WS/T 121-1999中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045电缆话国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售版权专有不得翻印开本 880×12301/16　印张1/2字数９千字2000年6月第一版　2000年6月第一次印刷印数 1-1 000标目 41159 WS/T 121—1999前言本标准以卫生部医政司编写的《全国临床检验操作规程第二版(1997)》中所列载脂蛋白A，和载脂蛋白B测定方法为基础，并参考美国国家临床实验室标准委员会批准的“载脂蛋白免疫测定法”准则(NCCLS文件1/LA 15-A,1997)而制定。本标准从2000年5月1日起实施。本标准由卫生部医政司提出。本标准由卫生部北京老年医学研究所负责起草。本标准主要起草人：李健斋、王抒、国汉邦、唐蔚青。本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。 中华人民共和国卫生行业标准血清载脂蛋白 A1 及载脂蛋白 BWS/T 121-1999免疫透射比浊测定法Guidelines for the immurio-turbidimetric determination of serum apolipoprotein A, and apolipoprotein B1 范围本标准规定了测定血清载脂蛋白 A,和载脂蛋白B的免疫透射比浊测定法。本标准适用于临床与基础医学实验室做载脂蛋白 A,和载脂蛋白B免疫透射比浊测定，亦可作为生产厂商生产载脂蛋白A，和载脂蛋白B免疫透射比浊测定试剂盒的标准。2 测定原理本法血清中的载脂蛋白A,或载脂蛋白B分别与试剂中的特异性羊(或免)抗人载脂蛋白A,或抗人载脂蛋白B抗体相结合，形成不溶性免疫复合物，使反应液产生混浊，浊度高低反映血清样品中载脂蛋白A，或载脂蛋白B含量，后者可由校准血清所作剂量-响应曲线算出。3免疫原及抗血清的制备3.1免疫原(抗原)的制备3.1.1从混合新鲜人血清中提取免疫原。3.1.2提取抗原用的人血清必须包括人群样品中载脂蛋白A1、载脂蛋白B的各种抗原决定位点，包括各种表型的位点变化。3.1.3载脂蛋白A，从超速离心制备的人血清高密度脂蛋白提取，用凝胶过滤、离子交换层析或高效液相色谱技术提纯，所得纯载脂蛋白A，不得含有高密度脂蛋白中的其他载脂蛋白，特别是载脂蛋白A2，应达到免疫纯。3.1.4载脂蛋白B抗原用超速离心法制备密度在1.030～1.050g/mL部分的低密度脂蛋白。3.1.5载脂蛋白A，及载脂蛋白B抗原必须新鲜制备，在一20℃以下冰冻保存。在贮存中有潜在的丧失抗原位点的危险。避免反复冻融。注：提纯的载脂蛋白B分子不可逆地聚合，丧失抗原决定位点，故只能用纯低密度脂蛋白作免疫原。3.2抗血清的制备3.2.1用于免疫比浊测定的载脂蛋白A：、载脂蛋白B抗体为免抗人或羊抗人血清（多克隆抗体）。3.2.2抗血清特异性：应用双相免疫电泳和免疫印迹法鉴定抗血清，要与人血清主要蛋白质及其他载脂蛋白无交叉反应。3.2.3抗血清效价：用琼脂双向扩散法测定，中间孔加正常人血清（载脂蛋白A；或载脂蛋白B浓度1g/L左右)0.01mL，环绕四周的孔中分别加不同稀释度（如1：2,1：4，1：8,1：16,1：32,1：64)的抗血清0.01mL。载脂蛋白A，抗血清效价应不低于16,载脂蛋白B抗血清效价应不低于128。3.2.4载脂蛋白A,抗血清应对高密度脂蛋白各亚型、载脂蛋白B抗血清应对极低密度脂蛋白、中间中华人民共和国卫生部1999-12-09批准2000-05-01实施1 WS/T 121 -- 1999密度脂蛋白、低密度脂蛋白及其各亚型都有反应。3.2.5抗血清外观应澄清。3.2.6 抗血清的保存：加入适量防腐剂的抗血清在冰冻条件下（一70℃C)保存三年。一般情况下经过纯化或处理的抗血清应用液保存时间不宜过长。注1载脂蛋白B有B-100与B3-48之分因为B-48是B-100分子氮基末端的部分，所以用多克隆抗体只能测总载脂蛋白B,除非已证明所用抗血清对载脂蛋白 B-48无交叉反应。单克隆抗体特异性高、易于纯化，但需作严格的鉴定与选择以了解其对存在于不同脂蛋白中的同种载脂蛋自的2抗原位点是否都能起反