山东大学生化实验报告-蛋白质浓度测定.docVIP

生物化学实验报告——蛋白质浓度的测定（Folin-酚试剂法） 蛋白质浓度的测定（Folin-酚试剂法） 【实验目的】 熟悉并掌握用Folin-酚法测定蛋白质浓度的方法。 【实验原理】 蛋白质（或多肽）分子中含有酪氨酸或色氨酸，能与Folin-酚试剂起氧化还原反应，生成蓝色化合物，蓝色的深浅与蛋白质浓度成正比，可通过绘制标准曲线，用比色法测定蛋白质浓度。 【实验试剂】 1.标准酪蛋白200ug/ml 2.Folin-酚乙液（原液与水按1:1比例混合，实验室已准备） 3.Folin-酚甲液（实验室已准备） A液 4%Na2CO3: 0.2%NaOH=1：1 B液 1%CuSO4 : 2%酒石酸钾钠=1：1 A：B= 50：1 混匀 4.样品血清（稀释200倍） 【实验步骤】 准备9支干净的试管，按表一顺序加入试剂 表一 序 序 号 试 剂 1 2 3 4 5 6 7 8 9 标准蛋白/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 0 0 血清（稀释 200倍）/ml 0 0 0 0 0 0 0.2 0.2 0.2 水/ml 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.8 0.8 0.8 各试管中加入5ml Folin-酚甲液，用旋涡摇匀器充分混合均匀，静置水浴（37度）10min。 各试管中加入0.5ml Folin-酚乙液，用旋涡摇匀气充分混合均匀，静置水浴（37度）30min。 使用分光光度计，用640nm波长进行比色。 【实验结果】 表二 各试管中标准蛋白浓度和OD值 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 标准蛋白 浓度ug/ml 0 40 80 120 160 200 / / / ODλ=640nm 0 0.09 0.139 0.206 0.261 0.309 0.177 0.177 0.17 A、B、C三支试管中液体在640nm处OD值的平均值为 ODλ=640nm=（0.177+0.177+0.17）/3=0.175 如图一 蛋白质浓度的标准曲线，当OD=0.175时，标准蛋白质浓度为109.375μg/ml，则所测样品血清的浓度为109. 375μg/ml，经转化，样品血清浓度为10.9375g/100ml 图一 蛋白质浓度的标准曲线 【思考讨论】 结果分析，三组平行实验最终测得的OD值理论上是一样的，但我们的实验结果中有一个数值偏离较大，给最终的实验结果带来误差。分析原因：①可能是因为加样的误差造成的三个试管中卵清蛋白的浓度不同，最终影响测定结果 ②可能是因为没有充分混匀，导致每个试管中的浓度不同③可能是因为分光光度计自身误差造成的。 实验注意事项： 在使用分光光度计时，拿比色皿要拿它的毛面，不可以用手接触它的光滑面，防止自己手上的油污导致测量值不准确。 在比色皿中装入的液体量大约是比色皿体积的三分之二，太多容易洒出来，给测量造成不便，太少也容易造成测量的不准确。 一定要注意实验时间，因为溶液的光密度值随时间会发生变化，时间太长会导致测量误差。