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微生物的反应过程动力学;
10.1 概述
;
10.2 酶催化反应
; 酶在参与反应时如同化学催化剂一样,参与反应决不会改变反应的自由能,亦即不会改变反应的平衡,只能降低反应的活化能,加快反应达到平衡的速度,使反应速率加快。反应终了时,酶本身并不消耗,且恢复到原来的状态,其数量与性能都不改变,前提是不能改变酶的蛋白质性质。
以单底物S生成产物P的酶催化反应为例,E表示游离酶,其反应历程为;;与化学催化相比较,酶催化具有下述特点:
①酶的催化效率高
②酶催化反应具有高度的专一性,它包括酶对反应的专一性和酶对底物的专一性。
③酶催化反应的反应条件温和,无需高温和高压。
④酶催化反应有其适宜的温度、pH、溶剂的介电常数和离子强度等。
影响酶催化反应速率的因素很多,它们分别是酶浓度、底物浓度、产物浓度、温度、酸碱度、离子强度和抑制剂等。; 对于典型的单底物酶催化反应,例如
其反应机理可表示为; 由Michaelis Menten的快速平衡法或Briggs Haldane的拟定态法假设,推导得到的米氏方程定量描述了底物浓度与反应速率的关系,即
米氏方程为双曲函数,如图10-2所示。起始酶浓度一定时,不同底物浓度呈现的反应级数不同。当 时,底物浓度很低,反应呈现一级; 时,底物浓度高,反应呈现零级,即r与 大小无关,趋于定值 ;底物浓度为中间值时,随着 增大反应从一级向零级过渡,为变级数过程。; 例10-1 在pH为5.1及15℃等温下,测得葡萄糖淀粉酶水解麦芽糖的初速率与麦芽糖浓度的关系如下:
试求该淀粉酶水解麦芽糖反应的 和 。;解: 将米氏方程线性化,经重排得
由此式可知, 为线性关系,故可根据题给出数据计算
值,列于表中。利用线性最小二乘法,将表10-1的数据代入前式,回归得
所以; 酶催化反应中,某些物质的存在使得反应速率下降,这些物质称为抑制剂,其效应称为抑制作用。抑制作用可分为两类,即可逆性抑制与不可逆性抑制。不可逆性抑制将使活性酶浓度减少,若抑制物浓度超过酶浓度时,则酶完全失活;当酶与抑制物之间靠非共价键相???合时称为可逆性抑制。根据产生的抑制机理不同,可逆性抑制又可分为三种类型,即竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制。;
;(2)非竞争性抑制 有些抑制物往往与酶的非活性部位相结合,形成抑制物—酶的络合物后会进一步再与底物结合;或是酶与底物结合成底物—酶络合物后,其中有部分再与抑制物结合。
;(3)反竞争性抑制 有些抑制剂不能直接与游离酶相结合,而只能与底物-酶络合物相结合形成底物-酶-抑制剂中间络合物。;(4)底物抑制 有些酶催化反应速率与底物浓度关系不是双曲函数,而是抛物线关系。;
10.3 微生物的反应过程动力学
; 细胞的生长速率 定义为:在单位体积培养液中,单位时间内生成的细胞(亦称菌体)量,即
均衡生长类似于一级自催化反应,以细胞干重增加为基准的生长速率与细胞浓度成正比,其比例系数为μ,即;; 在间歇培养中基质消耗速率为
表示单位细胞浓度的基质消耗速率,即
表示单位细胞浓度产物的生成速率,即; Gaden根据产物形成与细胞生长间的不同关系,将发酵分为三种类型,即Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。Ⅰ型称为细胞生长与产物合成偶联型。Ⅱ型称为细胞生长与产物合成半偶联型。Ⅲ型称为细胞生长与产物合成非偶联型。; 氧的消耗速率亦称摄氧率(OUR),它表示单位体积培养液中,细胞在单位时间内消耗(或摄取)的氧量,即
描述氧消耗速率的一个重要参数是比耗氧速率 ,亦称呼吸强度。它表示单位菌体浓度的氧消耗速率,即
对于一般微生物反应,氧消耗量=基质燃烧需氧量-细胞燃烧需氧量-代谢产物燃烧需氧量;
10.4 固定化生物催化剂
; 固定化酶是将酶固定在载体或限制在一定局部空间范围内,经固定化的酶虽然可以克服游离酶的缺点,但尚需进行提取与纯化,才能得到酶,且固定化酶只适用于简单的酶反应。固定化酶和固定化细胞统称为固定化生物催化剂。
固定化细胞是指将细胞固定在载体上或限制在一定局部空间范围内。按细胞的生理状态,固定化细胞可分为固定化死细胞,固定化休止细胞和固定化增殖细胞。; 酶和细胞的固定化方法很多,通常有吸附法,包埋法,共价结合法和交联法。
(1)吸附法 有表面法和细胞聚集法两种。
(2)包埋法 是细胞或酶固定化最常用的方法,它是将酶或细胞固定在高分子化合物的三维网状结构中。现有三种包埋法,即凝胶包埋法、微胶囊包埋法和纤维包埋法。
(3)共价结合法
(4)交联法;;
10.5 生化反应器
; 一般生化反应器
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