片段载体加样量对组装效率的影响.docxVIP

摘要 　　基因克隆技术和组装技术是重要的分子生物学工具。基因工程有五项基本操作：目的基因的分离，酶切，连接，转化，菌落的筛选。在重组连接的过程中，大片段组装基因和小片段组装基因中，载体和片段的加样量使组装效率产生差异性。本文通过设计多个载体和片段的加样量，找到了对于大分子基因和小分子基因的最适反应体系，大分子组装片段载体各0.1pmol最佳，为节省载体可片段0.1 pmol ，载体0.03pmol。小分子（sGRNA）组装加样 0.1：0.1和0.1:0.03（片段：载体）pmol效率最高。通过该研究大大提高了组装效率以及克隆的阳性率。 关键词：基因克隆，重组连接，片段，载体，组装效率 第一