抗体的人工制备.pptVIP

抗体基因片段的获得 从B细胞DNA库中筛选； 用探针从杂交瘤细胞、免疫脾细胞的DNA库或cDNA库中筛选； 以PCR法直接扩增。 第二十九页，共四十九页，2022年，8月28日 一、嵌合抗体（Chimeric antibody) 是指在同一抗体分子中含有不同种属来源抗体片段的抗体，又称杂种抗体。 迄今构建的嵌合抗体多为“鼠-人”类型，也就是抗体的Fab或F(ab)2来源于鼠类。而Fc片段来源于人类。 第三十页，共四十九页，2022年，8月28日 重构抗体 第三十一页，共四十九页，2022年，8月28日 第三十二页，共四十九页，2022年，8月28日 第三十三页，共四十九页，2022年，8月28日 第三十四页，共四十九页，2022年，8月28日 第三十五页，共四十九页，2022年，8月28日 第三十六页，共四十九页，2022年，8月28日 第三十七页，共四十九页，2022年，8月28日 第三十八页，共四十九页，2022年，8月28日 第三十九页，共四十九页，2022年，8月28日 第四十页，共四十九页，2022年，8月28日 第一页，共四十九页，2022年，8月28日 人工制备抗体 多克隆抗体 （polyclonal antibody ） 单克隆抗体 （monoclonal antibody ） 基因工程抗体 （genetic engineering antibody) 第二页，共四十九页，2022年，8月28日 （一）多克隆抗体（polyclonal antibody(PcAb) 用传统方法将抗原物质免疫动物, 由于这些物质由多种抗原分子组成或由多种抗原决定簇组成, 可刺激不同淋巴细胞克隆, 产生多种Ig, 即多克隆抗体。 由此获得的抗血清是一种多克隆的混合抗体，具有高度的异质性。 第三页，共四十九页，2022年，8月28日 缺点 它不能针对某一特定表位，特异性不高，常出现交叉反应； 同时也不易大量制备，其应用受到限制。 第四页，共四十九页，2022年，8月28日 多克隆抗体主要来源于 动物免疫血清 恢复期患者血清 免疫接种人群 第五页，共四十九页，2022年，8月28日 PcAb制备的基本过程 抗原制备 动物免疫 试血测定抗体效价 血清分离与保存 多抗纯化与标记 第六页，共四十九页，2022年，8月28日 用于制备抗血清的动物 小鼠、 大鼠、 兔、 羊、 马等大动物。 第七页，共四十九页，2022年，8月28日 （二）单克隆抗体 （monoclonal antibody ，McAb） 由单一B细胞克隆针对某一抗原决定簇产生的完全均一的只对某一抗原决定簇起反应的特异性抗体, 即为单克隆抗体。 通过杂交瘤技术获得。 第八页，共四十九页，2022年，8月28日 针对一个抗原决定簇 由一个B细胞分化、增殖产生的子代细胞集团产生的， 针对一个抗原决定簇的抗体，即由单一B细胞克隆合成的抗体。 第九页，共四十九页，2022年，8月28日 第十页，共四十九页，2022年，8月28日 第十一页，共四十九页，2022年，8月28日 第十二页，共四十九页，2022年，8月28日 第十三页，共四十九页，2022年，8月28日 特点： 1.高度均一性 2.高度专一性 3.大量产生 4.及稳定性 第十四页，共四十九页，2022年，8月28日 应用 作为诊断试剂用于许多血清学检测; 已广泛应用于疾病的诊断、 特异性抗原或蛋白的检测和鉴定、 疾病的被动免疫治疗 或与核素、毒素、化学药物偶联导向药物, 用于肿瘤治疗。 第十五页，共四十九页，2022年，8月28日 单克隆抗体的生产 动物体内生产系统 细胞培养生产系统 第十六页，共四十九页，2022年，8月28日 动物体内生产系统 将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔，杂交瘤细胞可在小鼠腹腔中无限繁殖，导致腹水产生，每毫升腹水可获得5~20mg的单克隆抗体，一般一次可收腹水5~10mL,间隔3~4d 采一次，可多次反复采集。 第十七页，共四十九页，2022年，8月28日 选择培养基 常用HAT选择培养基，H为次黄嘌呤（hypoxanthine）,T为胸腺嘧啶核苷（thymidine)，二者都是旁路合成DN A的原料；A是氨基喋呤（ aminoplerin）,是细胞合成DNA的阻断剂。 在DMEM培养基中加入 H、A、T三种成分即制成HAT选择培养基，在该培养基中，未融合的骨髓瘤细胞不能生长，因它缺乏HGPRT酶下能利用旁路途径合成DNA，内源性的合成又受到氨基喋呤的阻断；至于未融合的脾细胞则在2周内自然死亡．所以只有融合的杂交瘤细胞才能在该培养基中生长。 第十八页，共四十九页，2022年，8月28日 细胞培养生产系统 悬浮培养系统 细胞固定化培养系统 第十九页，共四十九页，2022年，8月28日