基于Microarray芯片技术筛选大鼠脑创伤后皮层差异表达的microRNA的开题报告.docxVIP

基于Microarray芯片技术筛选大鼠脑创伤后皮层差异表达的microRNA的开题报告 一、研究背景 创伤性脑损伤是一种常见且严重的神经系统疾病，其发病率和死亡率均较高。脑损伤后的恶化包括脑水肿、细胞凋亡、神经递质紊乱等，均引起了脑功能障碍。microRNA是一种短链非编码RNA，可以调控基因表达，影响细胞的生长、分化、凋亡等过程。近年来，越来越多的研究表明，microRNA在脑损伤后的神经回路调节、轴突重生等方面具有重要的作用。目前，通过芯片技术筛选microRNA已成为一种可靠的研究方法。因此，本研究将通过Microarray芯片技术筛选大鼠脑创伤后皮层差异表达的microRNA，以期为深入研究创伤性脑损伤提供思路和方法。 二、研究目的 本研究旨在通过Microarray芯片技术筛选大鼠脑创伤后皮层差异表达的microRNA，找出与脑损伤后神经功能恢复相关的microRNA，并对这些microRNA进行初步的生物信息学分析，探讨其可能的作用机制，以期为深入研究创伤性脑损伤提供积极的思路和方法。 三、研究内容和技术路线 3.1 研究内容 （1）收集大鼠脑创伤后皮层组织，并提取组织RNA； （2）通过Microarray芯片筛选差异表达的microRNA； （3）筛选出差异表达显著的microRNA进行生物信息学分析，包括基因本体论分析、生理通路分析、转录因子预测等； （4）通过实验验证筛选的microRNA在创伤性脑损伤后神经功能恢复中的作用。 3.2 技术路线 （1）实验操作：包括大鼠脑创伤模型制备、组织取样、组织RNA提取等实验操作。 （2）Microarray芯片技术：采用商业化的miRNA芯片，利用实验室自行制备的抗体将RNA样品转录为cDNA，经过至少两次扩增，其中一个样品使用Cy3标记，另一个样品使用Cy5标记，将两个样品进行杂交，接着通过扫描仪扫描荧光信号，得到芯片的原始数据。数据分析主要采用Cluster、TreeView等软件进行分析。 （3）生物信息学分析：利用Ingenuity Pathway Analysis软件进行差异表达microRNA的功能分析。通过从多个数据库中搜索预测microRNA的基因靶点，建立microRNA-基因互作网络，进行基因本体论分析、生理通路分析、转录因子预测等。 （4）实验验证：包括细胞培养、实验处理、实验检测等。选取差异表达显著的microRNA，通过腺病毒载体将其表达于细胞内或体内，观察其对神经功能恢复的影响。 四、研究意义及预期结果 本研究通过Microarray芯片技术筛选大鼠脑创伤后皮层差异表达的microRNA，可为深入研究创伤性脑损伤提供关键微量分子的新思路和新方法。预期结果包括： （1）找出与脑损伤后神经功能恢复相关的microRNA； （2）初步探讨这些microRNA的作用机制； （3）为建立损伤性神经功能恢复的预防及治疗提供理论基础及新的线索。 五、研究进度安排 本研究的进度安排如下： （1）前期准备，包括问题提出、文献搜集、实验设备、试剂和材料准备等。预计时间：1个月。 （2）实验与数据分析，包括大鼠脑创伤模型制备、组织RNA提取、Microarray芯片技术检测、数据分析等。预计时间：6个月。 （3）生物信息学分析及实验验证，包括基因本体论分析、生理通路分析、转录因子预测、实验验证等。预计时间：6个月。 （4）数据统计、报告撰写及答辩等。预计时间：2个月。 本研究总计预计用时15个月，计划于2022年6月完成。