玉米 高粱主要病害抗病性鉴定技术规范（第7部分：玉米青霉穗腐病）.pdfVIP

玉米 高粱主要病害抗病性鉴定技术规范 第7部分：玉米青霉穗腐病 1　范围 本文件规定了玉米抗青霉穗腐病病原物的分离制备、接种和田间鉴定及抗性评价方法。 本文件适用于栽培玉米（Zea mays L. ）自交系和杂交种等种质资源对玉米青霉穗腐病抗性的人工 接种鉴定及评价。 2　规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1　 玉米青霉穗腐病 Penicillium ear rot of maize 由青霉属Penicillum spp.真菌所引起的玉米穗部病害。 3.2　 籽粒伤口接种 kernel inoculation 利用可定量的连续注射器于果穗中部进行创伤注射的接种技术或采用长有青霉菌菌丝体的牙签刺 穿苞叶并保留在籽粒上的接种技术。 4　接种体的分离鉴定和制备 4.1　分离、鉴定 以常规组织分离法和单孢分离法（见附录 A ）从田间采集的具有典型玉米青霉穗腐病症状的果穗 分离获得纯培养物，利用形态学和分子生物学鉴定为青霉属真菌草酸青霉（Penicillum oxalicum Currie et Thom ），4 ℃ 保存备用。 4.2　制备 4.2.1 分生孢子悬浮液的制备 挑取 4.1 保存的青霉菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂（Potato Dextrose Agar ，简称 PDA ）培养基 25 ℃ 培养 5 d 后，用无菌打孔器打取菌落边缘直径 5 mm 的菌饼，将其接种于马铃薯葡萄糖培养液（Potato Dextrose ，简称 PD ）中 120 r/min 培养 5d 。培养物经灭菌的双层纱布过滤，获得分生孢子悬浮液，用 6 无菌水将孢子浓度调至 2 ×10 个/mL ，即可用于接种。PDA PD培养基配方见附录 C 。 4.2.2 带菌牙签的制备 将灭菌木质牙签均匀铺在PDA平板上，在平板上接种青霉菌。黑暗下培养 7 d～10 d，待菌丝长满 牙签后即可用于接种。 5　鉴定圃设置 1 5.1　试验设计 鉴定材料随机排列或顺序排列。在进行选育品种抗病性鉴定时，每30行鉴定材料设1组已知抗病 感病对照材料（见附录B ）。在进行种质资源抗病性鉴定时，每50行鉴定材料设1组已知抗病和感病对 照材料，鉴定圃周边应设置保护行。鉴定圃应具备良好的自然发病环境和排灌设施，鉴定圃确定后不 应随意更换 5.2　种植要求 鉴定材料播种时间与生产播种时间相同。 鉴定小区行长 5m ，行距 0.6 m ，条播或穴播，每行保苗 21 株，低于 13 株时视为该品种/材料鉴 定无效。鉴定种质资源时，每份鉴定材料种植 1 行；鉴定选育品种时，每份材料种植 2 行。土壤肥力 水平和耕作管理与大田生产相同。 6　接种 6.1　接种时期 接种时期为果穗吐丝后14 d～ 21 d ，接种可全天进行。 6.2　接种方法 6.2.1 针刺接种 用侧孔空心金属针连接有注射接种液的器具在雌穗中上部苞叶外进行穿刺，当金属针刺入籽粒时， 注射 2ml 接种液。 6.2.2 牙签接种 将经过培养后带有大量病原菌菌丝的牙签直接在雌穗中上部苞叶外刺入并达到籽粒中部。为确保 菌丝被带入籽粒，接种采用双牙签法，也可用尖的金属器具先在雌穗上钻孔，然后插入带菌牙签。 6.3　接种前后的田间管理 接种鉴定田不应特殊管理。玉米接种后适度保持田间大气湿度即可满足发病要求。 7　调查 7.1　时间 在玉米生理成熟后进行调查，同批次接种材料应在同一天完成。 7.2　方法 采收接种的雌穗，去除苞叶后逐穗调查并对雌穗籽粒被病菌侵染的面积进行分级记载。 7.3　病情分级 依据表1中的描述，逐个记载调查雌穗的发病级别。 表1 玉米对穗腐病抗性鉴定的病情级别划分 病情分级 描述 1 发病面积占雌穗总面积0～1% 3 发病面积占雌穗总