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荧光定量PCR原理及实验步骤 i=j 、实时荧光定量PCR原理 常规PCR技术对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时检测。实时定量PCR技术，在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。 几个概念： （1）扩增曲线： EuaQ?日三』黄州醐帝扩增曲统图; EuaQ?日三』 黄州醐帝扩增曲统图; 璧里标：扩增浦环数（Cybele）:觐坐标*荧光强度每个循环讲行一次荧光信号的收集 （2）荧光阈值: 5—%荧光信号阚值（threshold:□前15 5—% 荧光信号阚值（threshold: □前15个褚环信号作为荧光本底信号 （baselinej.瓯樟本的荧光背景值和明性对照的荧光僵 □荧光域建刊旗省设置是个陆环的荧光信号的标准偏差的10借 □丰劫设置=座则要大于样本的荧光背景值和阴性时照的荧光最高值.同时要尽呈选择拱.入指数期的最初阶携「并且保证回归系数大于0.99 □真正的信号3荧光信号超过域值 （3）Ct值: Ct值的定义: PCR扩增过程中’扩增产物的荧光信号达到设定的阚值时所经过的扩增循环次数 （4）标准曲线 □模板DNA量越多、荧光达到域值的循环数越少.即Ct值越小 □Log浓度与循环数呈线性关系.通过已知起始拷贝数的标