上海市中药饮片沪地龙炮制规范标准公示稿.pdfVIP

上海市中药饮片炮制规范标准草案公示稿 沪 地 龙 Hudilong 【来源】本品为钜蚓科动物通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛蚓Pheretima guillelmi （Michaelsen ）或栉盲环毛蚓Pheretima pectinifera Michaelsen 的干燥体。夏季捕捉， 及时剖开腹部，除去内脏和泥沙，洗净，晒干或低温干燥。 【习用名称】蚯蚓干。 【炮制】将药材除去杂质，喷潮，切短段，快洗，及时干燥，筛去灰屑。 【性状】本品呈薄片状及段状，边缘略卷，片状者摊平宽0.8~1.5 cm，段状者宽0.5~0.8 cm，厚约0.5 mm 。背部黄褐色至棕褐色，腹部浅黄棕色，具紧密的环节，段状者有的一端 钝圆，先端有1 小孔。体轻，质韧。气腥，味微咸。 【鉴别】（1）本品粉末淡灰色或灰黄色。斜纹肌纤维无色或淡棕色，肌纤维散在或相互 绞结成片状，多稍弯曲，直径4~26 μm ，边缘常不平整。表皮细胞呈棕黄色，细胞界限不明 显，布有暗棕色的色素颗粒。刚毛少见，常碎断散在，淡棕色或黄棕色，直径24~32 μm ， 先端多钝圆，有的表面可见纵裂纹。 （2 ）取本品粉末1 g，加水10 ml，加热至沸，放冷，离心，取上清液作为供试品溶液。 另取赖氨酸对照品、亮氨酸对照品、缬氨酸对照品，加水制成每1 ml 各含1 mg、1 mg 和0.5 mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2020 年版 通则0502 ）试验，吸取 上述四种溶液各3 μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4:1:1 ）为展开 剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在 105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 （3 ）取本品粉末1 g，加三氯甲烷20 ml ，超声处理20 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加 三氯甲烷1 ml 使溶解，作为供试品溶液。另取沪地龙对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。 照薄层色谱法（中国药典2020 年版 通则0502 ）试验，吸取上述两种溶液各5 μl ，分别点于 同一硅胶G 薄层板上, 以甲苯-丙酮（9:1 ）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm ）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 起草单位： 上海市食品药品检验研究院 1 （4 ）取本品粉末0.3 g，加入蛋白裂解液[4%十二烷基硫酸钠（SDS ），20 mmol/L 二硫 苏糖醇（DTT ），50 mmol/L 三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液（用2 mol/L 盐酸调节pH 值至8.8 ）] 5 ml，置于80℃超声处理（功率1130 W，频率37 kHz ）1 小时，放置至室温，离心20 分钟 （每分钟12000 转），取上清液200 μl ，加入0.5 mol/L 碘乙酰胺（IAA ）溶液20 μl ，室温避 光封闭放置45 分钟，加入丙酮900 μl （-20℃预冷），充分混匀，-20℃沉淀4 小时，于4℃ 离心20 分钟（每分钟 12000 转），弃去上清液，残渣用丙酮（-20℃预冷）洗涤2 次，每次 200 μl，丙酮挥干，残渣加8 mol/L 尿素溶液50 μl，超声处理30 分钟，加50 mmol/L 碳酸氢 铵溶液400 μl ，混匀，加胰蛋白酶溶液20 μl （取序列分析用胰蛋白酶，加50 mmol/L 碳酸氢 铵溶液制成每1 ml 中含1 mg 的溶液，临用时配制），混匀，37℃恒温酶解 18 小时，作为供 试品溶液。另取沪地龙对照药材0.3 g，同法制成对照药材溶液。照高效液相色谱-质谱法（中 国药典2020 年版 通则0512 和通则0431 ）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱 柱内径为2.1 mm ）；以乙腈为流动相A ，以0.1% 甲酸溶液为流动相B ，按下表中的规定进行 梯度洗脱；流速为每分钟0.4ml 。采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+ ），进行多反应