DB35T 1929-2020鸭瘟抗体间接ELISA 试剂盒检测技术规范.docxVIP

ICS ICS 11.220 B 41 DB DB35 福 建 省 地 方 标 准 DB35/T 1929—2020 鸭瘟抗体间接 ELISA 试剂盒检测技术规范 Detection technical specification of indirect ELISA test kit for duck plague antibody 2020 - 09 - 29 发布 2020 - 12 - 29 实施 福建省 市场监督管理局 发 布 I DB35/T 1929—2020 目 次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 疫病简述 1 4 原理 1 5 主要仪器 1 6 主要试剂 1 7 试剂盒的组成、组装和保存 2 8 试剂盒的要求 3 9 样品的采集、保存与运输 4 10 试剂盒操作步骤 4 11 结果判定 5 附录 A(规范性附录) 相关试剂的配制 6 参考文献 8 II DB35/T 1929—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由福建省农业科学院提出。 本标准由福建省农业农村厅归口。 本标准起草单位：福建省农业科学院畜牧兽医研究所、福建省动物疫病预防控制中心、福州市动物 疫病预防控制中心。 本标准主要起草人：陈珍、傅光华、刘道泉、刘荣昌、黄瑜、史惠、吴波平、陈翠腾、陈冬群、 陈秀明、施少华、朱春华、刘斌琼、蔡国漳。 1 DB35/T 1929—2020 鸭瘟抗体间接 ELISA 试剂盒检测技术规范 1 范围 本标准规定了鸭瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的检测技术规范。 本标准适用于鸭血清中鸭瘟抗体的定性检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件。 GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法 3 疫病简述 鸭瘟(duck plague，DP) 又称为鸭病毒性肠炎，俗称“大头瘟”，是由鸭瘟病毒引起的一种急性、 高度致死性传染病，不同日龄的鸭均易感染。特征病变为食道、小肠和泄殖腔粘膜出血、坏死、溃疡， 病程稍长者食道和泄殖腔粘膜表面形成黄白色伪膜。该病传播迅速、发病率和死亡率高，广泛流行于我 国华南、华中和华东地区。 4 原理 本标准是针对鸭瘟抗体间接ELISA试剂盒建立的检测技术规范。工作原理为：当鸭血清中鸭瘟抗体 阳性时，在间接ELISA抗体反应过程中，鸭血清中的鸭瘟抗体先与包被的纯化鸭瘟病毒结合，形成抗原 抗体复合物，随后与辣根过氧化物酶(HRP) 标记的羊抗鸭IgG相结合，加入显色剂显色，置450 nm波长 下测定光密度值(OD450 ) ，通过分析其P/N值判定鸭血清中鸭瘟病毒抗体的水平。 5 主要仪器 所使用的主要仪器如下： a) 酶标仪(具有 450 nm 波长滤光片) 。 b) 37 ℃±1 ℃恒温箱。 c) 96 孔酶标板。 d) 振荡器。 e) 可调微量移液器：包括多道(10 μL、100 μL、300 μL) 和单道等。 6 主要试剂 所使用的主要试剂如下： 2 DB35/T 1929—2020 a) 包被抗原：按照附录 A 中 A.1 配制。 b) 标准阳性血清：按照附录 A 中 A.2 配制。 c) 标准阴性血清：按照附录 A 中 A.3 配制。 d) 参考品：阳性参考品(通过中和试验和本试剂盒检测均为阳性) 20 份，阴性参考品(通过中 和试验和本试剂盒检测均为阴性) 20 份，每份参考品分装为每支 15 μL 装于无菌离心管中， 做好标记，置于-70 ℃±5 ℃保存备用。 e) 酶标二抗：HRP 标记的羊抗鸭 IgG。 f) TMB 显色液：TMB 含量为 200 μg/mL。 g) 碳酸盐缓冲液：按照附录 A 中的 A.4 配制。 h) 20×PBS 溶液：按照附录 A 中的 A.5 配制。 i) 稀释液：按照附录 A 中的 A.6 配制。 j) 洗涤液：按照附录 A 中的 A.7 配制。 k) 终止液：按照附录 A 中的 A.8 配制。 除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂，实验用水应符合GB/T 6682—2008中一级水的要 求。 7 试剂盒的组成、组装和保存 7.1 试剂盒 A 的组成 7.1.1 标准阴性血清，10 μL，清亮、无溶血。 7.1.2 标准阳性血清，10 μL，清亮、无溶血。 7.1.3 酶标二抗，10