人乙肝核心抗原HBcAg酶联免疫分析ELISA.docxVIP

人乙肝核心抗原（HBcAg）酶联免疫剖析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于检测人血清，血浆及有关 液体样本中乙肝核心抗原（HBcAg）水平，感染人的血液学诊疗。 实验原理： 本试剂盒采纳双抗体夹心酶联免疫法（ ELISA）测定标本中人乙肝核心抗原（ HBcAg）。 用纯化的人乙脑病毒抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中乙肝核心抗原（ HBcAg） 相联合，经清洗除掉未联合的抗体和其余成分后再与 HRP标志的乙脑病毒抗体联合，形成 抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过完全清洗后加底物 TMB显色。TMB在HRP酶的催化下 转变成蓝色，并在酸的作用下转变成最后的黄色。 用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值对比较，进而判断标本中人乙肝核心抗原（ HBcAg）的存在与否。 试剂盒构成： 试剂盒构成 48孔配置 96孔配置 保留 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保留 阴性比较 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保留 阳性比较 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保留 酶标试剂 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保留 样品稀释液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保留 显色剂A液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保留 显色剂B液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保留 停止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保留 浓缩清洗液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保留 样本办理及要求： 血清：室温血液自然凝结10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。认真采集上清，保留过程中如出现积淀，应再次离心。 2.血浆：应依据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混淆10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。认真采集上清，保留过程中若有积淀形成，应当再次离心。 尿液：用无菌管采集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。认真采集上清，保留过程中若有积淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照推行。 4.细胞培育上清：检测分泌性的成份时，用无菌管采集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 1 分）。认真采集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（）稀释细胞悬液，细胞 浓度达到100万/ml左右。经过频频冻融，以使细胞损坏并放出细胞内成份。离心20分 钟左右（2000-3000转/分）。认真采集上清。保留过程中若有积淀形成，应再次离心。 组织标本：切割标本后，称取重量。加入必定量的PBS，PH7.4。用液氮快速冷冻保留备 用。标本消融后仍旧保持2-8℃的温度。加入必定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。认真采集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 标本采集后尽早进行提取，提取按有关文件进行，提取后应赶快进行实验。若不可以立刻进行试验，可将标本放于-20℃保留，但应防止频频冻融. 不可以检测含NaN3的样品，因NaN3克制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤： 1. 编号：将样品对应微孔按次编号，每板应设阴性比较 2孔、阳性比较 2孔、空白比较1 孔（空白比较孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作同样） 2. 加样：分别在阴、阳性比较孔中加入阴性比较、阳性比较 50μl。而后在待测样品孔先 加样品稀释液40μl，而后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不 涉及孔壁，轻轻晃动混匀， 3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。 4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩清洗液加蒸馏水至 600ml后备用 5. 清洗：当心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满清洗液，静置 30秒后弃去，这样 重复5次，拍干。 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 温育：操作同3。 清洗：操作同5。 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟 停止：每孔加停止液50μl，停止反响（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序丈量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加停止 液后15分钟之内进行。 结果判断： 试验有效性：阳性比较孔均匀值≥1.00;阴性比较均匀值≤0.10 临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性比较孔均匀值+0.15 阴性判断：样品OD值临界值（CUTOFF）者为人乙肝核心抗原（HBcAg）阴性 阳性判断：样品OD值≥临界值（CUTOFF）者为人乙肝核心抗原（HBcAg）阳性 注意事项 1．操作严格依据说明书进行，本试剂不一样批号组分不