紫花杜鹃的HPLC指纹图谱及聚类分析.docx

? ? 紫花杜鹃的HPLC指纹图谱及聚类分析 ? ? 李川晶，孙 琦，南敏伦，白 雪，张家贺，赫玉芳，5，赵全成 (1吉林农业大学·吉林 长春 130118；2吉林正容医药发展有限责任公司·吉林 敦化 133700；3吉林省中医药科学院·吉林 长春 130012；4吉林吉春制药股份有限公司·吉林 四平 136504；5长春中医药大学·吉林 长春 130117) 紫花杜鹃为杜鹃花科植物紫花杜鹃(RhododendronmariaeHance)干燥叶或带叶嫩枝[1]。被1977年版《中国药典》收载为药材品种。据研究表明紫花杜鹃具有抑菌抗炎、抗血小板聚集、镇痛的功效[2-3]，临床应用治疗慢性支气管炎。目前对紫花杜鹃质量控制的研究主要集中在槲皮素的含量测定，但是单一成分含量不能作为评价药材质量好坏的依据，《中国药典》也未有紫花杜鹃质量标准的规范，导致紫花杜鹃质量不可控，所以本文选取3个省份4个产区共13批药材样品对其中6种成分进行指认，有利于控制紫花杜鹃质量，为该药材进一步的开发研究提供有效依据。 由于中药材组分复杂，建立有效的检测方法极其重要，黄辉强等运用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱联用技术(UPLC/Q-TOF-MS)分析紫花杜鹃黄酮类成分[4]，该技术有分离度高，速度快，灵敏度高等优点，但UPLC/Q-TOF-MS对于样品前期处理较复杂，检测成本较高，仪器设备不普遍，质量标准及含量测定的日常研究受到限制。因此，本文以指纹图谱对不同产地不同批次紫花杜鹃进行质量探究，指纹图谱从整体角度对药材质量的检测更完善，能系统的观察到中药所含的化学成分和含量，为进一步控制中药材的质量奠定依据[5]。 1 仪器与试药 1.1 仪器 Agilent 1220：安捷伦公司；BS 124S电子天平：METTLER TOLEDO 仪器有限公司；KQ-250A型超声波清洗器：北京科伟永兴仪器有限公司；XTP-500A高速多功能粉碎机：浙江省永康市红太阳机电有限公司。 1.2 试药 槲皮素、槲皮苷、金丝桃苷、芸香苷、山柰酚和齐墩果酸对照品：均购于中国食品药品检定研究院，批号分别为：100081-201610、111538-201606、110861-201310、111521-201205、110709-201206、100080-201610，；水为娃哈哈纯净水；乙腈、磷酸为色谱纯；实验所用紫花杜鹃药材于2018年4月—2018年6月采自3 个省份4 个产区，由吉林省中医药科学院赵全成教授鉴定均为杜鹃花科杜鹃属真品，13批样品的信息见表1。 表1 紫花杜鹃样品来源 2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备 精密称取芸香苷、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素、齐墩果酸和山柰酚适量，用甲醇溶解制备得到每毫升含芸香苷0.0 101 mg、金丝桃苷0.0 128 mg、槲皮苷0.0 753 mg、槲皮素 0.0 230 mg、齐墩果酸0.2 010 mg和山柰酚0.0 212 mg的对照品混合溶液。 2.2 供试品溶液的制备 紫花杜鹃药材干燥叶粉碎(过60目筛)，取粉末0.5 g，精密称取，置锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，水浴回流1 h，放置室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 2.3 色谱条件 色谱柱为ACE C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相A(乙腈)、B(0.2%磷酸水)，梯度洗脱：0～32 min A 由10%升至19%；32～50 min A由19%升至30%；50～60 min A由30%升至40%；60～70 min A由40%升至50%；70～80 min A由50%升至60%；80～90 min A由60%升至70%；90～100 min A 由70%升至90%；100～105 min A由90%降至10%；105～110 min A保持10%；流速为1.0 mL·min-1；检测波长为280 nm；柱温为30 ℃；进样量10 μL。 2.4 方法学考察 2.4.1 精密度试验 取S3样品，按“2.2”方法处理供试品溶液，以“2.3”项下色谱条件分别进样6次，结果目标峰相对保留时间的RSD0.59%，相对峰面积的RSD1.03%；表明本方法精密度良好。 2.4.2 稳定性试验 取S3样品，按“2.2”方法处理供试品溶液，以“2.3”项下色谱条件分别在0、2、4、8、16、24 h进样，检测目标峰，结果目标峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于0.45%表明供试品溶液在24 h内稳定。 2.4.3 重复性试验 取S3样品，按“2.2”方法处理供试品溶液，以“2.3”项下色谱条件分别进样6次，结果目标峰相对保留时间的RSD0.39%，相对峰面积的RSD0.61%，表明本方法重复