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- 2023-08-22 发布于上海
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三角帆蚌3个免疫基因的克隆与表达分析的中期报告
本实验旨在克隆三角帆蚌(Meretrix meretrix)中的免疫基因,并对其进行表达分析。
目前为止,我们已经完成了以下工作:
1.从三角帆蚌中分离出RNA并反转录成cDNA。
2.使用PCR技术克隆出三角帆蚌中的三个免疫基因编码序列,分别为MMIFN、MMLBP和MMTNF。将它们插入到表达载体pET-32a (+)中。
3.用E.coli BL21 (DE3)细胞转化了pET-32a (+)质粒,然后用蛋白表达条件进行表达。
我们已经得到了表达蛋白,但还需要进行进一步的纯化和鉴定。我们计划使用Ni-NTA蛋白亲和层析柱进行表达蛋白的纯化,然后用SDS和Western blotting方法鉴定表达蛋白。
在表达蛋白的同时,我们还进行了实时荧光定量PCR分析,以确定病原菌感染和免疫诱导对MMIFN、MMLBP和MMTNF基因的表达影响。结果表明,三个基因在病原菌感染和免疫诱导后均表现出不同程度的上调。
在未来的工作中,我们将继续进行表达蛋白的纯化和鉴定,并进行更详细的表达分析,以进一步了解三角帆蚌的免疫机制。
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