卡维地洛和不同剂量美托洛尔抗动脉粥样硬化作用的对比研究.docxVIP

卡维地洛和不同剂量美托洛尔抗动脉粥样硬化作用的对比研究 动脉硬化（as）是许多心脑血管疾病的基本病象之一，也是老年人常见的疾病之一，严重危及人类健康。氧化损伤是AS病变过程中核心环节, 而平滑肌细胞的迁移增殖是斑块形成、管腔狭窄的直接原因。β-受体阻滞剂抗AS作用近年来逐步受到重视。国外BCAPS和ELVA两项研究初步揭示了β-受体阻滞剂具有不依赖于其降血压作用的抗AS效应, 但其作用机制尚待进一步研究。本实验经高脂饮食加免疫损伤血管内皮制备家兔动脉粥样硬化模型, 通过给予卡维地洛和不同剂量美托洛尔, 观察其对AS病变过程中脂质过氧化损伤、血管壁增殖细胞核抗原 (PCNA) 以及核因子kBp65 2期 丁思华, 田建会, 赵梅, 等.不同β-受体阻滞剂抗家兔动脉粥样硬化作用的研究 143 (NFkBp65) 活化的影响, 进一步阐述其抗AS作用机制, 并对二者的疗效进行对比, 从而为临床治疗AS病人提供依据。 1 材料和方法 1.1 批准文号:国药,国药 美托洛尔由阿斯利康制药有限公司提供, 批准文号:国药准字卡维地洛由齐鲁制药有限公司提供, 批准文号:国药准字 1.2 主试剂 PCNA和NFkBp65及相关SP试剂盒购自武汉博士德生物工程研究所。 1.3 图像分析系统vidas21图像分析 上海精密仪器厂721型分光光度计, 美国Lambert公司石蜡切片机, 日本Olympus公司显微照相装置, 德国欧波同公司VIDAS 21图像分析系统。 1.4 第19-243号 健康雄性新西兰大耳白兔40只 (购于华中科技大学同济医学院实验动物学部, 合格证号:医动字第19-025号) , 体质量 (2.50±0.25) kg, 分笼饲养。随机分为正常组 (A组) 、高脂组 (B组) 、小剂量美托洛尔组 (C组) 、大剂量美托洛尔组 (D组) 以及卡维地洛组 (E组) , 每组8只。 1.5 高脂饲料配方 家兔适应性喂养1周后, 除正常组外, 其余4组均一次性经耳缘静脉注射牛血清清蛋白250 mg/kg, 然后均行高脂饮食。高脂饲料配方为:1 g胆固醇+5 g猪油+94 g普通饲料。另外, 小、大剂量美托洛尔组每日清晨分别行美托洛尔10、20 mg/kg灌胃, 卡维地洛组每日清晨行卡维地洛10 mg/kg灌胃, 正常组每天给以100 mg普通饲料喂养。各组连续喂养10周, 饲养过程中小、大剂量美托洛尔组各有1只家兔死于腹泻, 高脂组有1只家兔死于过敏性休克。 1.6 进行保持心脏功能 喂养10周后, 各组动物均以250 g/L乌拉坦溶液4 mL/kg腹腔麻醉, 沿胸骨正中线纵向剖开胸腔暴露心脏, 直视下行右心室穿刺抽血。采用黄嘌呤氧化法检测血清超氧化物歧化酶 (SOD) 的活性, 硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛 (MDA) 的含量, 各操作步骤严格按说明书进行。 1.7 中性多聚甲醛片本组 高脂组、小剂量美托洛尔组、大剂量美托洛尔组及卡维地洛组动物均在主动脉弓病变处取材, 大小约1.0 cm×0.5 cm;正常组亦在主动脉弓处取材, 大小约1.0 cm×0.5 cm。标本分别放入40 g/L中性多聚甲醛中固定, 逐步脱水、透明、浸蜡、包埋制成蜡块。每一标本连续切片2张, 分别用于PCNA及NFkBp65免疫组化检测, 各操作步骤严格按说明书进行。 1.8 阳性信号总吸光度 PCNA及NFkBp65阳性表达主要在细胞核内, 呈棕褐色。VIDAS 21计算机图像分析系统检测一定面积阳性信号面积值和阳性信号平均吸光度, 并计算二者乘积, 即积分吸光度。测定时每一病理切片在高倍镜 (400倍) 下随机取10个视野, 取其平均值。 1.9 统计分析 统计结果采用SPSS 11.5软件进行方差分析, 组间比较采用q检验;变量间比较采用相关分析。 2 结果 2.1 各组血清sod活性和mda含量比较 与正常组比较, 高脂组血清SOD活性明显降低, MDA含量增加, 差异有显著意义 (F=8.40、41.22,q=3.81、11.27,P0.05) ;高脂组及小、大剂量美托洛尔组血清SOD活性和MDA含量比较无统计学差异 (q=0.28~0.41,P0.05) ;与高脂组及小、大剂量美托洛尔组比较, 卡维地洛组血清SOD活性明显升高, 血清MDA含量明显下降 (q=1.13~9.45,P0.05) 。见表1。 2.2 血管壁pcna和nfhpbp65的表达 高脂组动物血管壁PCNA和NFkBp65的表达较正常组明显增加 (F=138.46、78.67,q=54.32、32.59,P0.05) ;高脂组及小、大剂量美托洛尔组、卡维地洛组血管壁PCNA和NFkBp65的表达依次减少, 差异有显著性 (q=28.89