分子生物学实验报告_3.docVIP

实 验 报 告 科目：分子生物学实验 姓名：　　　 实验组：　　 学号： 单位：　　　　　　　　 学院：　生命科学学院　　班级2012年9月至11月 实验一 从cDNA文库和克隆质粒中扩增靶片段 第一部分 准备实验 一、介绍实验室的规章制度、注意事项 二、准备实验 分组，分发实验服、试验用具 讲解注意点：戴手套操作 准备枪头：装盒，灭菌 各个型号的EP管和PCR管的灭菌 双蒸水灭菌 洗净培养皿、摇菌小三角瓶、试剂瓶等 第二部分 利用PCR技术从特定质粒中扩增靶片段 一、实验目的 通过本实验学习PCR反应的基本原理，掌握PCR的基本操作技术。 二、实验原理 一）引物的设计： PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。因此，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。 我们可以归纳十条PCR引物的设计原则： 1.引物的特异性 引物与非特异扩增序列的同源性不要超过70%或有连续8个互补碱基同源。 2.避开产物的二级结构区 某些引物无效的主要原因是引物重复区DNA二级结构的影响，选择扩增片段时最好避开二级结构区域。 3.长度? 寡核苷酸引物长度为15～30bp，一般为20～27mer。引物的有效长度：Ln=4（G+C）+2（A+T），Ln值不能大于76，因为76时，最适延伸温度