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基因工程学时 第一页，共二十六页，2022年，8月28日 基因工程概念： 应用人工方法把生物的遗传物质（DNA）分离出来，在体外进行切割、拼接和重组。然后将重组的DNA导入某种宿主细胞或个体，从而改变它们的遗传品性；或者使新的遗传信息在新的宿主细胞或个体中大量表达，以获得基因产物（多肽或蛋白质）。 第二页，共二十六页，2022年，8月28日 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ 基因工程技术的一般步骤 第三页，共二十六页，2022年，8月28日 第一节 基因工程理论的研究基础 第二节 基因工程基本技术路线 第三节 常用的工具酶和载体 第四节 目的基因片段的获取 第五节 目的基因导入受体细胞 第六节 克隆子的筛选和鉴定 第四页，共二十六页，2022年，8月28日 第一节 基因工程理论的研究基础 染色体是遗传物质的载体。 “基因”一词的创立：1909年，丹麦遗传学家约翰逊提出了“基因”（gene）一词。 “基因型”与“表现型” 术语，初步阐明基因与性状的关系。不过此时的基因仍是一个未经证实，仅靠逻辑推理得出的概念。 第五页，共二十六页，2022年，8月28日 基因结构示意图 ＋链5’ －链3’ 上游 3’ 5’ 第六页，共二十六页，2022年，8月28日 基因工程研究的理论依据： 不同基因具有相同的物质基础 基因是可以切割的 基因是可以转移的 多肽与基因之间存在对应关系 遗传密码是通用的 基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代 第七页，共二十六页，2022年，8月28日 第二节 基因工程的一般步骤 生物材料 RNA DNA mRNA cDNA文库 基因组文库 人工合成 目的基因 克隆载体 重组DNA 受体细胞 克隆子 转基因生物 第八页，共二十六页，2022年，8月28日 第三节 常用的工具酶和载体 3.1 工具酶 （一）限制性核酸内切酶： (二）DNA连接酶： （三）DNA片段末端修饰酶： (四) DNA聚合酶 第九页，共二十六页，2022年，8月28日 (一)限制性核酸内切酶 （Restriction endonuclease） （1）限制性核酸内切酶定义 一类以环形或线形双链DNA为底物，能识别DNA中特定核苷酸序列，并在合适反应条件下使每条链的一个磷酸二酯键断开，产生具有3’－OH和5’－P基团DNA片段的内脱氧核苷酸酶。 第十页，共二十六页，2022年，8月28日 （2）限制性核酸内切酶种类 I型酶：它们在识别位点很远的地方任意切割DNA链 II型酶：在其识别位点之中或临近的确定位点特异地切开DNA链。它们产生确定的限制片段和跑胶条带 III型酶：它们在识别位点之外切开DNA链，并且要求识别位点是反向重复序列；它们很少能产生完全切割的片段，因而不具备实用价值，也没有人将其商业化。 第十一页，共二十六页，2022年，8月28日 根据分离此酶微生物的学名，一般取3个字母。 第一个字母大写 该微生物属名前的第一个字母 第二、三个字母小写 该微生物种名前的2个字母 第四个字母大写 有变种或品系的第一个字母 罗马字母Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 从一种微生物中发现了几种 限制酶，按发现顺序排列 如EcoRⅠ是指从大肠杆菌（Escherichia coli）R株分离得到的第一种限制酶。 （3）限制性核酸内切酶的命名 第十二页，共二十六页，2022年，8月28日 H i n d III Haemophilus influenzae d 属名 种名 株名 嗜血流感杆菌d株 发现的第三种限制 性内切酶 第十三页，共二十六页，2022年，8月28日 （4）限制性内切酶作用模式图： （a) 产生5′突出粘性末端(sticky end) EcoR I **********GAATTC******** **********CTTAAG******** 5′ 3′ 5′ 3′ *********G *********C T T A A 5′ 3′ 3′ 5′ —OH — P A A T T C********* G********* 5′ 3′ 3′ 5′ P OH— 第十四页，共二十六页，2022年，8月28日 (b） 产生3′突出粘性末端 Pst I **********CTGCAG************** **********GACGTC************** 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 3′ 5′ —OH — P *********C T G C A *********G 5′ 3′ 3′ 5′ OH— — P A C G T C*********** G****