EGF刺激前后MDA-MB-468细胞核磷酸化蛋白质组学分析的中期报告.docxVIP

EGF刺激前后MDA-MB-468细胞核磷酸化蛋白质组学分析的中期报告 这是关于MDA-MB-468细胞核磷酸化蛋白质组学分析的中期报告，重点关注EGF刺激前后蛋白质的变化。 介绍： EGF是一种重要的生长因子，参与许多细胞生长和分化的过程。MDA-MB-468细胞是一种人乳腺癌细胞，具有高度恶性和侵袭性。我们使用液相色谱质谱法（LC-MS/MS）技术对MDA-MB-468细胞进行蛋白质组学分析，以研究EGF刺激前后MDA-MB-468细胞核磷酸化蛋白质的变化。 方法： 1. 细胞培养和EGF刺激 MDA-MB-468细胞在含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中培养，37℃、5% CO2下培养。当细胞密度达到70%以上时，用DMEM液体培养基含1% FBS预处理12小时后，加入10ng/ml的EGF对细胞进行刺激，刺激时间为30分钟。 2. 细胞裂解 刺激后，使用磷酸盐缓冲液（PBS）清洗MDA-MB-468细胞，然后使用RIPA裂解液从细胞膜中提取全蛋白，包括磷酸化蛋白。 3. 蛋白质分离和富集 使用蛋白质A+G的亲和层析柱富集磷酸化蛋白，然后使用胶体电泳对蛋白质进行分离，获得等量的两个样品：EGF刺激前和刺激后的MDA-MB-468细胞核磷酸化蛋白样品。 4. 液相色谱质谱法分析 使用液相色谱质谱法对样品进行分析。使用Thermo Fisher Ultimate 3000 RSLCnano系统进行分离，使用Thermo Fisher Q-Exactive Plus质谱仪进行检测和数据分析。 结果： 比较EGF刺激前后的样品，我们发现许多磷酸化蛋白质存在数量上的变化。其中包括核转录因子NF-kB、STAT3等。我们还发现许多细胞信号通路中的蛋白质磷酸化发生变化，包括EGFR、ERK、AKT、mTOR等。这些蛋白质对于细胞的增殖和分化具有重要的作用。 结论： EGF刺激前后，MDA-MB-468细胞核磷酸化蛋白质组发生了显著的变化，许多细胞信号通路受到了影响。这些结果为深入研究EGF对人乳腺癌发生和发展的影响提供了重要的参考。