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海洋细菌香港红树林的分离及次生代谢产物研究 吕源天然产品一直是人类丰富的药物资源。随着对土地资源的深入研究，新药物的初始化合物变化变得越来越困难。传统抗生素抗剂性迅速发展，尤其是新菌病毒和新病毒。因此，人们逐渐关注尚未开发的巨大自然资源，尤其是海洋，并渴望找到新的药物特征来地球。 编号为4454的海洋真菌分离自香港红树林, 种属未定。本文首次研究了该菌的次级代谢产物, 从其发酵培养液分离到3个化合物, 通过分析波谱数据分别鉴定为尿嘧啶 (A) 、甘露醇 (B) 和草酸 (C) 。 1 实验部分 1.1 仪器和试剂 (1) 核磁共振谱仪 美国Varian公司INOVA 500NB超导核磁共振谱仪, 英国VG公司 ZAB-HS双聚焦磁质谱仪, 北京X4型显微熔点仪 (温度计未校正) 。 (2) 试剂和仪器 葡萄糖 (C, P.) , 蛋白胨 (B, R.) , 酵母膏 (B, R.) , 粗海盐 (微生物养殖用) , 溶剂为广州化学试剂厂生产 (使用前重蒸) , 柱层析硅胶为青岛海洋化工厂生产的200～300目硅胶H, 薄层层析硅胶为青岛海洋化工厂生产的硅胶HF254, 其它均为市售 (AR.) 试剂。 1.2 病毒 海洋真菌4454号分离自香港红树林, 无孢子生成, 种属未定。 1.3 水调ph 培养基:葡萄糖10 g, 蛋白胨2 g, 酵母膏1 g, 粗海盐3.5 g, 自来水1 L, 调pH 7.0。110 L培养基分装500 mL三角瓶, 每瓶装培养基200 mL, 1.25×105Pa灭菌15 min, 冷却后接种, 在25 ℃采用间歇式摇瓶培养32～36 d。 1.4 l乙醇破乳萃取 发酵总物呈胶冻状, 用纱布过滤得发酵液, 发酵液50 ℃减压浓缩至约5 L, 用等体积乙酸乙酯萃取2次;胶冻状菌丝体用50 L乙醇破乳, 纱布过滤得到的滤液于50 ℃减压回收乙醇后用等体积乙酸乙酯萃取2次。所有乙酸乙酯萃取液合并, 于50 ℃减压回收溶剂, 得发酵液粗提物约18.4 g, 粗提物硅胶拌样, 经硅胶柱层析, 石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱后再用乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱, 反复硅胶柱层析, 重结晶纯化, 分别得到化合物A (20 mg) , B (50 mg) 和C (30 mg) 。 1.5 一般化合物的实验数据 (1) mso-d6 黄色固体, mp 300 ℃, FABMS (m/z) :113 [M+H]+;1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ:10.89 (brs, 1H, NH) , 10.70 (brs, 1H, NH) , 7.35 (d, 8.5 Hz, 1H) , 5.43 (dd, 8.5, 6.0 Hz, 1H) ;13C NMR (500MHz, DMSO-d6) δ:164.8 (s) , 152.0 (s) , 142.6 (d) , 100.7 (d) 。 (2) d,5.0h,2h,2h,2h 无色针状晶体, mp 166～168 ℃,1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ:4.33 (d, 5.0 Hz, 2H) , 4.24 (t, 6.0 Hz, 2H) , 4.07 (d, 7.0 Hz, 2H) , 3.60 (m, 2H) , 3.55 (t, 7.5 Hz, 2H) , 3.46 (m, 2H) , 3.38 (m, 2H) 。 (3) 化合物c 无色块状晶体, mp 190～192 ℃,1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ:10.62 (br s) 。 2 化合物的鉴定 化合物A的FABMS谱在m/z113给出分子离子峰[M+H]+,1H NMR给出4个质子信号,13C NMR和DEPT谱给出4个碳信号, 其中2个季碳和2个CH。这些信息提示其分子式为C4H4N2O2, 计算不饱和度为4。氢谱中δ10.89 (brs, 1H, NH) 和10.70 (brs, 1H, NH) 为2个酰胺质子信号, δ7.35 (d, 8.5 Hz, 1H) 和5.43 (dd, 8.5, 6.0 Hz, 1H) 为双键质子信号;13C NMR中δ164.8 (s) 和152.0 (s) 为酰胺羰基碳信号, δ142.6 (d) 和100.7 (d) 为双键碳信号。根据这些信息推断该化合物为尿嘧啶。进一步对比文献值和标准物谱图得到证实。 化合物B为无色针状晶体, 难溶于乙酸乙酯、甲醇、石油醚等有机溶剂, 易溶于热水, 能燃烧。硅胶TLC展开碘熏不显色, 紫外灯照也不发荧光。测其熔点为166～168 ℃。这些信息初步提示可能为甘露醇。氢谱显示多个连氧质子信号和羟基质子信号, 其中在δ4.33 (d, 5.0 Hz, 2H) , 4.07 (d, 7.0