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不同提取方法提取草油化学成分的比较研究 草莓是介绍甘薯的植物。根和根茎是主要的药物部位。它具有镇静安神、解痉镇痛的功效。可用于治疗心烦痛、心悸失眠、癫痫、内脏易怒、跌倒和伤害等。长期以来，人们就把它用作镇静药。缬草含有挥发油、环烯醚萜类、黄酮类、生物碱类等化学成分,其中挥发油为缬草多种药理作用的主要活性成分。目前从缬草中提取挥发性成分多采用水蒸气蒸馏(steam distillation,SD)与超临界二氧化碳萃取(supercritical fluid extraction CO2,SFE-CO2)两种方法,为了进一步确定最佳提取法,笔者采用超临界CO2萃取法和水蒸气蒸馏法从缬草中提取缬草油,并用气相色谱-质谱联用(GC-MS)法对提取物进行化学成分定性和定量比较。 1 仪器和试剂盒 1.1 仪器 HA221-40-11-C型超临界萃取装置(江苏南通华安超临界萃取有限公司),Varian431-GC,Varian210-MS。 1.2 败酱科草属植物草 缬草药材2010年10月购于湖北省巴东县,经湖北中医学院鉴定教研室鉴定为败酱科缬草属植物缬草(Valeriana officinalisL.)的根及根茎。试剂均为分析纯。 2 试验溶液的制备 2.1 挥发油的提取 称取药材100 g,按2010年版《中华人民共和国药典》一部(附录ⅩD)项下的甲法提取挥发油,得到挥发油1.321 3 g,收率为1.32%。精密称取挥发油0.660 g(相当于药材50 g),使用乙醚定容至250 mL,然后加入无水硫酸钠适量,放入冰箱中,使用前用孔径0.45 μm的微孔滤膜过滤。 2.2 有机溶剂提取 取药材300 g,置超临界CO2萃取釜中提取。萃取压力为12 MPa;萃取温度为45 ℃;分离釜压力为5 MPa;分离釜温度为35 ℃;CO2平均流量20 L·h-1;萃取时间1.5 h。得到提取物7.005 3 g,收率为2.34%。精密称取提取物1.167 3 g(相当于药材50 g),用乙醚定容250 mL,然后加入无水硫酸钠适量,放入冰箱中,使用前用孔径0.45 μm的微孔滤膜过滤。 3 测量条件 3.1 供试品及进样量 色谱柱为VF-5ms(30 m×0.25 mm,0.25 μm);载气为氦气(纯度99.999%);流速1.0 mL·min-1;供试品进样量1 μL;进样口温度250 ℃。程序升温设置如下:起始温度60 ℃,以5 ℃·min-1升温至124 ℃,再以1 ℃·min-1升温至150 ℃,然后以2 ℃·min-1升温至200 ℃,最后以10 ℃·min-1升温至250 ℃并维持5 min。 3.2 分流比1:1 电离方式EI,原电子能量70 eV;离子源温度250 ℃;扫描质量范围40 ~600 aum;分流比10:1;色谱-质谱接口温度280 ℃;溶剂延迟3 min。 通讯作者刘焱文(1945-),男,湖北武汉人,教授,学士,主要从事中药及其制剂有效成分的研究工作。电话:(0E-mail:ywliu@public.wh.hb.cn。 标准质谱图库NIST。 4 化合物的鉴定 对两种提取法所得的供试品进行分析,得总离子流图(图1,2)。经质谱数据系统检索,比对相关质谱资料和图谱人工解析,鉴定个样品的化学成分,并用面积归一化法确定各组分相对含量,见表1。 图1SFE-CO2法提取缬草油总离子流图 Fig.1 Total ion chromatogram of valerian oil extracted by SFE-CO2 图2SD法提缬草挥发油总离子流图 Fig.2 Total ion chromatogram of valerian oil extracted by SD 由表1可知,水蒸气蒸馏法提取缬草挥发油共分离出70种化合物,鉴定了其中的67种。已鉴定化合物组分占总馏出组分的95%以上,占色谱总馏出峰面积的99%以上。含量最高的组分是乙酸龙脑酯,相对含量31.27%,其次为2(1H)naphthalenone,3,5,6,7,8,8a-hexahydro-4,8a-dimethyl-6-(1-methylethenyl)-,相对含量16.188%。相对含量较高的还有莰烯(12.61%)、4,6,6-trimethyl-2-(3-methylbuta-1,3-dienyl)-3-oxatricyclo[5.1.0.0(2,4)]octane(4.575%)、龙脑(4.27%)、α-蒎烯(3.465%)、bicyclo[3.1.1]hexane,4-methylene-1-(1-methylethyl)-(1.138%)。 超临界CO2萃取法提取的缬草挥发油中,共分离出109种化合物,鉴定了