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(一)2021 年 4 月·杭州二模
回答与转基因雷公藤培育过程有关的问题:
(1)将含______________酶的混合液在 55℃水浴锅中活化,0.22 μm 微孔滤膜____灭菌。取雷
公藤悬浮细胞,加入酵混合液,黑暗条件下______________培养以分离原生质体。
(2)原生质体的活力检测采用台盼蓝染色法(台盼蓝可穿透死细胞的细胞膜,使死细胞中的 DNA
着色,但无法进入活细胞内),原生质体活力的计算方法为:_______________________占该视
野下原生质体总数的百分比。
(3)由于原生质体来源于黑暗条件下培养的雷公藤悬浮细胞,因此其细胞中不含____________。
将原生质体与含____________的植物表达载体质粒混合,在黑暗条件下完成转化后,再用激光
作扫描光源的显微镜观察,统计发出绿色荧光的原生质体数占观察到的所有原生质体数的百分
比,以此确认原生质体的转化效率。
(4)将转化后的原生质体进行培养,重新长出细胞壁,形成胚性细胞。此时,应该____________
培养基中甘露醇浓度,以利于胚性细胞继续培养形成细胞团,然后形成再生植株。再生植株需
去除____________________理并进行锻炼后才能移种大田。
(二)2021 年 4 月·嘉兴二模
植物原生质体分离所需酵的保存要求较高,为了解决这个问题,采用 13%CPW 洗液冲洗蜗牛消
化道,获取含消化酵的混合液,该混合液可直接用于相关实验。
(1)含蜗牛消化醇的混合液能用于去除细胞毫原因是蜗牛是一种_____________动物,它的消化
液中含有__________________。
(2)用该混合液处理会对细胞造成一定的伤害,原因是__________________,为减轻对细胞的
伤害,需要控制好处理__________。
(3)植物原生质体的分离和培养结合__________________技术,可以克服远源杂交不亲和,从
而培养优质的________多倍体植物。植物原生质体的分离和培养结合__________________—技
术,从而实现使外源基因表达和原有基因________________________的作物新品种。
2021 年 4 月·绍兴适应性考试
回答与基因工程和植物克隆有关的问題。
(1)用植物叶片分离原生质体时,要先用 70%乙醇和5%次氯酸钠进行_____________处理,再
用适宜浓度的甘露醇溶液使细胞处于__________________状态,有利于酶分解细胞壁,减少原
生体损伤。
(2)先将目的基因插入农杆菌的 T-DNA,接着让__________________和植物原生质体共同培养,
可以实现目的基因向原生质体的转移和整合。再生细胞壁后,在含有__________________的培
养基上筛选获得具有抗性的细胞,并通过液体悬浮培养,获得一定数量具有
__________________特征的单细胞,经诱导发生类似受精卵经过卵裂、分化、_______________
和形态建成而发育成胚状体,然后再发育成完整植株。
(3)常利用茎尖进行植物克隆,一方面茎尖细胞相较叶肉细胞具有更高的_______________,另
一方面,由于________________________,易获得脱毒苗。
2021 年 4 月·湖州丽水衢州三市质检
回答下列与转基因植物培育相关问题:
(1)从基因文库中选择钓取某种抗病蛋白A 的基因的方法有:利用核酸探针釆用
_________________技术,使得在适当条件下,该探针与互补的目的基因片段形成双链从而筛
选出来;或者将基因文库中的所有基因进行表达,然后利用__________________作为探针采用
抗原-抗体杂交技术,找出能与探针特异性结合的表达产物,进而获得与之对应的目的基因。
(2)由于植物细胞壁的存在,重组 DNA 导入细胞具有一定的难度。在较高渗透压的甘露醇溶液
环境下用__________________处理根尖、叶片等可以获得球形的原生质体。原生质体的培养需
考虑原生质体的__________________、培养基的__________________、渗透压、温度和 PH 等
因素的影响。
(3)将重组 DNA 用__________________法导入原生质体。原生质体再生成细胞壁后培养得到的
细胞具有_
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