SDSPAGE原理和流程操作步骤详解.pptxVIP

SDSPAGE原理和流程操作步骤详解;一、什么是SDS;SDS的作用;一、SDS的基本原理;1、SDS;2、强还原剂 巯基乙醇（β-mercaptoethanal）;SDSPAGE原理和流程操作步骤详解;SDS和还原剂的作用： 分子被解聚或组成它们的多肽键 氨基酸侧链与SDS充分结合形成带负电荷的蛋白质-SDS胶束 蛋白质-SDS胶束所带的负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，消除了不同分子之间原有的电荷差异;蛋白质-SDS胶束的特点 形状像一个长椭圆棒 短轴对不同的蛋白质亚基-SDS胶束基本上是相同的 长轴的长度则与亚基分子量的大小成正比;胶束在SDS系统中的电泳迁移率不再受蛋白质原有电荷的影响，而主要取决于椭圆棒的长轴长度，即蛋白质或亚基分子量的大小。 当蛋白质的分子量在15KD—200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系;3、影响SDS电泳的关键因素 溶液中SDS单体浓度 大多数蛋白质与SDS结合的重量比为1：1.4 样品缓冲液的离子强度 低离子强度的溶液中，SDS单体才具有较高的平衡浓度;（3） 二硫键是否完全被还原 当二硫键被彻底还原后，蛋白质分子才能被解聚，SDS才能定量地结合到亚基上而给出相对迁移率和分子量对数的线性关系。;（二）缓冲系统的选择 一般情况下，在被分析的蛋白质稳定的pH范围，凡不与SDS发生相互作用的缓冲液都可以使用，但缓冲液的选择对蛋白质的