环境工程微生物学微生物污染及其检测技术.pptVIP

第二节 水质的细菌学检验 一、细菌总数 将定量水样（原水样或稀释水样1mL）接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板 37oC培养24hr后观察结果，计菌落数， 计算原水样每毫升的细菌总数。 具有相对的卫生学意义： 菌数越高，水体受有机物污染或粪便污染越重，病原菌污染的可能性亦大（为什么？）。 二、粪便污染指示菌 人畜粪便中常常带有大量的微生物，水质的卫生学检验，对于保护人群健康，具有重要意义 有些属于正常的、对人体无害的肠道微生物， 有些则是病原微生物，进入水体后，可造成水体的污染，从而引发各种肠道疾病。 致病菌数量少，直接检测复杂，选用间接指标即粪便污染指示菌为代表。 以肠道正常细菌在水中的存在及数量作为粪便污染的指示。 健康成人粪便内的微生物数量 微生物名称 每克粪便中平均生长菌落数 主要微生物 ? 拟杆菌属 1010 乳酸杆菌属 109 大肠埃希氏菌属 108 粪链球菌 108 次要的微生物 ? 柠檬酸杆菌属 105-106 梭菌属 105-106 葡萄球菌属 105-106 克雷伯氏菌属 104-105 肠杆菌属 104-105 芽孢杆菌属酵母属 104-105 霉菌 104-105 较少的微生物 ? 变形菌属 102-103 铜绿假单胞菌属 102-103 （一）指示菌的理想条件 大量存在于人的粪便，数量比病原菌多； 受粪便污染的水中易检测出，未受污染的水中无检测； 在水体中不会自行繁殖； 存活时间略长于致病菌，对消毒剂的抵抗略强于致病菌； 检出及鉴定方法比较简易迅速； 适用于各种水体。 （二）适宜的指示菌 总大肠菌群， 粪大肠菌群、 大肠杆菌埃希氏菌（大肠杆菌） 克雷伯氏菌属。 三、大肠杆菌 （一）特征 大肠杆菌定义： 一群需氧或兼性厌氧性的G-无芽孢杆菌，37oC培养24hr，能发酵乳糖产酸产气。包括了粪便内全部兼性需氧性G-杆菌，以大肠杆菌埃希氏菌属为主，以及柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等。 成人粪便排出菌数可达(5~100)×106 cfu/d。 （二）大肠菌群的测定 常用多管发酵法或滤膜法。 发酵法：又称多管发酵法或三步发酵法 初发酵（推测试验） 将不同稀释度的水样，分别接种于含乳糖等糖类的培养液(3倍或1倍乳糖液), 37oC培养24hr，观察产酸产气情况， 初步判断是否有大肠菌群存在。 2）平皿分离（证实试验） 水中其它细菌有可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。 初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基或远藤氏培养基上，37oC培养24hr， 根据菌落特征，挑取大肠菌群疑似菌落制片， 革兰氏染色证实是否为大肠菌群。 3） 复发酵试验（完成试验） 将大肠菌群疑似菌落再次接入1倍乳糖液，37oC培养24hr，产酸产气者即确证为大肠菌群。 结果计算 产酸、产气记为阳性反应， 不产酸、不产气记为阴性反应。 根据阳性管数量，查表计算水体大肠菌群数量。 2 滤膜法 发酵法检测需要时间较长，为缩短时间，可以采用滤膜法，其步骤为： 1）水样过滤：选用微孔滤膜，灭菌后抽滤一定量的待测水样，将水中的细菌截留在无菌滤膜上； 2）培养：将滤膜有菌面朝上贴于伊红美兰培养基或远藤氏培养基，经37oC培养16hr~18hr； 水体中的主要病原微生物类群 沙门氏菌属(Salmonella） 志贺氏菌属(Shigella） 霍乱弧菌(Vibrio cholerae) 肠道病毒属(Enterovirus) 甲型肝炎病毒(hepatitis A virus） Salmonella typhimurium (red) invading cultured human cells LT2A-SL1344 genome Shigella sonne的部分特性 Shigella typhimurium 微生物代谢物与环境污染 氨 硝酸与亚硝酸 氮氧化物 硫化氢 酸性矿水 甲基汞 农药代谢的毒性产物 细菌毒素 肉毒毒素(botulin) 葡萄球菌肠毒素 放线菌毒素 放线菌素 链脲菌素 洋橄榄霉素 真菌毒素 以黄曲霉毒素为例 剧毒, 黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Asp. parasiticus)产生 紫外线照射下可发出荧光 B族和G族，蓝色荧光和绿色荧光 已确定结构的黄曲霉毒素有17种，其中以黄曲霉毒素Ｂ1毒性最大，致癌力最强。 藻类毒素 甲藻 蓝细菌毒素 :微囊藻快速致死因子(Microcystis FDF) 第一章 环境监测中的微生物学方法 当环境受到污染后，环境的物理性质、 化学性质和生物学特性发生变化, 如： 重金属离子、NO3- 浓度增加； 水体污染变质，水生生物种类减少，甚至灭绝。 如何监测？ 化学方