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宁南霉素对烟草花叶病毒的预防和治疗作用 植物病毒有716种，分布广泛。大多数经济和粮食生产因病毒疾病的影响而降低或恶化。在植物疾病中，坦维（tv）是典型的草叶病毒，是草叶病毒科的主要类别。这是植物病毒的正链钠病毒，可以污染38个科的268种植物。病毒的病理变化使牧草的产量和品质进一步提高，对牧草的生产危害很大。发病率一般在25%以上，在50%以上。根据大理州植物检验站1991年至1994年的调查，种植面积4.104hm2a-1，4.02104hm2，种植面积4.02107kg，相当于563万元。为此，预计我国种植约1.33.06hm2a-1的香烟、香烟和花叶病化学剂主要包括天然硝酸盐和合成硝酸盐。近年来，由于对植物的绝对寄生性，植物病毒预防剂在国内外的防病毒控制剂主要分为天然毒毒剂和合成毒毒剂。近年来，抗植物病毒制剂取得了很大进展，但由于病毒对植物的绝对寄生性，目前开发的植物病毒预防剂的防效通常低于60%，其防效效果并不理想，远远不够。 宁南霉素(Ningnanmycin)是中国科学院成都生物研究所研制的胞嘧啶核苷肽型新抗生素,是一种高效、低毒、无“三致”和无蓄积的广谱杀菌剂,其生产菌经鉴定为诺尔斯链霉菌的一个新变种,定名为诺尔斯链霉菌西昌变种(Strepcomces nourseivar.xichangensis).多年研究表明,宁南霉素不仅对水稻白叶枯病、小麦、蔬菜等白粉病,而且对烟草花叶病、辣椒病毒病等多种病毒病都具有明显的防病和增产增值效果,已在生产应用中产生了极大的经济效益.然而在宁南霉素对烟草花叶病毒的生物活性影响方面尚未开展研究,制约了宁南霉素在生产上的广泛、合理利用. 因此,本研究利用不同处理,通过宁南霉素对烟草花叶病毒的预防、治疗和钝化效果,研究宁南霉素对TMV的生物活性,为宁南霉素在生产中合理有效利用提供理论基础. 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 试验剂 宁南霉素纯品由中国科学院成都生物研究所制备,水杨酸由北京化学试剂厂生产. 1.1.2 试验草品种 G28由云南省农科院粮食作物研究所杨木军研究员提供,该品种对TMV极感. 1.1.3 试验病毒 烟草花叶病毒(TMV)从中国科学院武汉病毒研究所购买. 1.2 方法 1.2.1 病斑抑制率的测定 各处理选5株长势相近的烟草,每株处理3片真叶,统计5株烟草3片真叶病斑的总和,并计算药效病斑抑制率: 病斑抑制率(%)= 对照5株烟草叶片病斑数?处理5株烟草叶片病斑数对照5株烟草叶片病斑数×100对照5株烟草叶片病斑数-处理5株烟草叶片病斑数对照5株烟草叶片病斑数×100 1.2.2 在温室里种植香烟苗 将烟草种子均匀撒在细土中,待烟苗长至2片真叶时移栽到小花钵中,烟苗长至第5片真叶完全展开时进行处理. 1.2.3 tmv接种法 取病毒叶片(约0.7 g),放入灭菌的研钵中,再加入适量的金刚砂及2 mL 0.01 mol/L的磷酸缓冲液(pH=7.2),用研棒研至叶片全部破碎,再加入磷酸缓冲液至20 mL.用摩擦法将TMV病毒液分别接种在烟苗叶片上. 1.2.4 tmv的制备 宁南霉素对TMV的预防试验:将宁南霉素纯品用无菌水稀释到200 μg/mL,用微量喷雾器将药液喷到叶片上,分别于施药后1 d、3 d、5 d接种TMV,接种7 d后进行观察记载,并计算病斑抑制率. 宁南霉素对TMV的治疗试验:接种TMV 1 d后分别用50 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL、200 μg/mL的宁南霉素药液喷洒叶片,喷宁南霉素药液7 d后进行观察记载,并计算病斑抑制率.接种后2 d、3 d后用200 μg/mL宁南霉素药液喷到叶片上,喷宁南霉素药液7 d后进行观察记载,并计算病斑抑制率. 宁南霉素对TMV的钝化试验:将制备好的TMV(方法同1.2.3)与200 μg/mL宁南霉素等体积混合,分别于30 min和45 min后用微量喷雾器将混合药液喷洒到带微伤的叶片上, 喷撒7 d后进行观察记载,并计算病斑抑制率. 对照组(CK):分别用无菌水、宁南霉素(200 μg/mL)和水杨酸(1 mmol/L)喷撒烟草叶面,不接种TMV.侵染对照烟苗仅接种TMV,不作其它任何处理. 2 结果与分析 2.1 宁南素对烟草病斑及烟草的处理效果 由表1可见,当用TMV接种烟草叶片7 d后,可观察到接种叶片出现大量病斑(图1-1B),对照组中TMV接种烟苗5株×3片真叶,病斑数达113个.当宁南霉素处理后1 d接种TMV,可观察到73个病斑,而在用宁南霉素处理后5 d才接种TMV的烟草,仅观察到的枯斑数47个,病斑抑制率可达58.41%(图1-2),优于提前3 d、1 d.至于是否更长的宁南霉素预处理时间将产生更好的防效,还有待进一步研究.此外,还观察到在经过宁