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10种真菌多糖对黄瓜花叶病毒的田间防效 黄瓜花叶病毒（cmv）是麻雀科的一种常见成员。CMV是一种单股正链RNA病毒,可侵染85科365属的1 000多种单、双子叶植物,可经蚜虫和种子传播,是寄主范围最多、分布最广、最具经济危害性的植物病毒之一。CMV病发病流行速度极快,可致作物生长发育停滞,严重影响农作物的产量和质量,造成严重的经济损失。 真菌多糖是各种真菌的子实体和菌丝体所产生的一类代谢产物,一般由10个以上的单糖通过糖苷键连接而成。真菌多糖在医学上应用广泛,相应的报道也很多,研究表明,真菌多糖通过抑制病毒吸附、干扰病毒复制和提高机体免疫力等途径达到抑制人体病毒病的目的。随着真菌多糖在医学领域研究的不断深入,一些农业工作者从中得到启示,开始了真菌多糖在农业病害领域的应用和研究。王杰等研究表明,食用菌多糖能够封闭病毒的侵染位点,抑制病毒在寄主中的增殖,并增强寄主抗性。张超等研究表明,平菇多糖、金针菇多糖和香菇多糖均对烟草花叶病毒(TMV)和CMV具有显著的抑制效果。吴艳兵等发现,毛头鬼伞多糖对TMV具有较强的体外钝化和抑制侵染复制作用,可有效预防TMV病毒病。真菌多糖具有与葡萄糖激发子类似的抗病、抑病活性,可诱导植株产生和积累植保素、几丁质酶等抗病性物质,它不仅能够通过诱发植物抗性、激发植物免疫力达到防治植物病毒病的目的,而且具有良好的环境兼容性,在病害防治方面具有良好的应用前景。 云芝(Coriolus versicolor)又称彩绒革盖菌,属于担子菌亚门。云芝多糖是云芝提取物中的主要活性成分,相对分子质量在1.3×106以上,是含有β(1→3)和β(1→6)糖苷键的葡聚糖。本研究测定了灰树花多糖、云芝多糖、灵芝多糖等10种真菌多糖对CMV的室内抑制作用及对烟草生长和烟苗中CMV含量的影响,并进一步研究了其田间防效,以期筛选出对CMV具有较好抑制活性的真菌多糖,为CMV的生物防治提供理论和实践依据。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 试验中的茶多酚 1.1.3 试验病毒 1.2 聚乙二醇peg4000 CMV粗提液的制备采用二次聚乙二醇沉淀法。将供试CMV病毒接种到NC89烟叶上,在22~30℃、自然光照条件下培养,5d后取67g感病叶片加134mL抽提缓冲液(0.5mol/L柠檬酸缓冲液,pH=6.5,含体积分数0.1%巯基乙醇),在组织捣碎机中捣碎,尼龙纱过滤后加氯仿至其体积分数为25%,振荡15 min,置4℃冰箱内1h,然后5 000r/min离心20 min,取上清液加入聚乙二醇(PEG6000)至其体积分数为8%,并加NaCl至其质量浓度为30g/L,搅拌至PEG完全溶化后,置4℃冰箱内,4h后,8 000r/min离心30min,取沉淀,用悬浮缓冲液(重蒸水)悬浮过夜,然后8 000r/min离心10min,取上清液,沉淀用悬浮缓冲液再洗一遍,合并2次上清液,其总体积为原体积的1/10。取上述上清液,加入PEG6000至其体积分数为8%,并加NaCl至其质量浓度为30g/L沉淀,向沉淀中加入少量悬浮缓冲液过夜,然后8 000r/min离心10min,所得上清液即为二次PEG6000沉淀的病毒粗提液。 1.3 测试方法 1.3.1 真菌多糖对基因型化的治疗作用 真菌多糖对CMV侵染的室内钝化、预防和治疗作用的测定参考陈年春、逢丽丽等的方法。(1)真菌多糖对CMV的钝化作用。选取长势一致的苋色藜,将配制好的500,1 000和2 000mg/L的10种真菌多糖溶液分别与上述制备的病毒粗提液按1∶1的体积比混合,钝化30min后,用半叶法摩擦接种到苋色藜的左半叶,右半叶接种病毒粗提液作为对照,每个处理3株,每株处理3片叶。将处理后的苋色藜在温室中培养(22~30℃、自然光照),3~4d后统计枯斑数,计算钝化效果。(2)真菌多糖对CMV的预防作用。选取长势一致的苋色藜,将配制好的500,1 000和2 000mg/L的10种真菌多糖溶液分别涂抹于苋色藜叶片左半叶,右半叶涂抹清水作为对照,3d时再涂抹1次多糖,5d时全叶摩擦接种病毒粗提液,每个处理3株,每株处理3片叶。将处理后的苋色藜在温室中培养(22~30℃、自然光照),3~4d后统计枯斑数,计算预防效果。(3)真菌多糖对CMV的治疗作用。选取长势一致的苋色藜,全叶摩擦接种病毒粗提液,待表现枯斑症状后,将配制好的500,1 000和2 000mg/L的10种真菌多糖溶液涂抹于苋色藜的左半叶,右半叶涂抹清水作为对照,每个处理3株,每株处理3片叶。将处理后的苋色藜在温室中培养(22~30℃、自然光照),3~4d后统计枯斑数,计算治疗效果。 1.3.2 真菌多糖喷药处理 选择长势一致的3~4叶期的NC89烟草幼苗移栽至花盆中,缓苗7d后,分别叶面喷施500,