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2株鸡艾美球虫dna疫苗免疫效果比较 抗鸡动物感染的检测具有很强的特异性，通常被认为是无虫无叶链免疫的一部分。但是Smith等报道,在某些虫种之间有血清学的交叉反应和交叉保护反应。李玉焕等对鸡用巨型艾美球虫(Eimeria maxima)卵囊免疫(1×104/只)后,再用柔嫩艾美球虫(E.tenella)、堆形艾美球虫(E.acervulina)、毒害艾美球虫(E.necatrix)卵囊大剂量(1×105/只)强毒攻击,分别有70%、40%、6%的鸡获得了完全保护,25%、60%、27%的鸡获得了部分保护。 国内外的研究均证实了鸡经选用某种艾美球虫免疫后,在种间存在不同程度的交叉免疫保护力。有关球虫DNA疫苗种间交叉免疫保护的报道较少,同时鉴于其对球虫DNA疫苗的研制有重要的指导意义。因此,笔者选用文献报道中免疫效果最理想的鸡柔嫩艾美球虫抗原基因pEtK2构建的DNA疫苗pcDNA4.0(c)-pEtK2-IL-2做交叉免疫试验,观察其在种间的交叉保护力。 1 材料和方法 1.1 dna疫苗pcdna4。0c-pek2-il-2 由笔者所在实验室提供,并采用碱裂解法、聚乙二醇沉淀法大量抽提制备。 1.2 验室提供材料 试验所用的柔嫩艾美球虫由笔者所在实验室保存并提供;堆形艾美球虫、巨型艾美球虫由扬州大学寄生虫研究室提供;毒害艾美球虫由广东兽医研究所提供。 1.3 实验动物 1日龄罗曼雏鸡,购自南京惠泉家禽育种有限责任公司。 1.4 试验组 随机分组,每组30只。包括1个非攻毒非免疫对照组,4个攻毒非免疫对照组及相应的4个攻毒免疫试验组。 1.5 肌肉注射免疫 以50 μg DNA疫苗pcDNA4.0(c)-pEtK2-IL-2分别在14和21日龄进行胸部肌肉注射免疫,注射剂量为0.5 mL。28日龄给各非免疫对照组与免疫试验组鸡分别口服柔嫩艾美球虫、巨型艾美球虫、堆形艾美球虫和毒害艾美球虫孢子化卵囊5×104/只。攻毒后第8 d剖杀,确定每克盲肠内容物卵囊数与盲肠病变记分。 1.6 前药及病理变化 平均增重1、平均增重2与相对增重率按文献方法进行,每克盲肠内容物卵囊数(OPG值)、卵囊产量下降率与抗球虫指数(ACI)按文献方法进行,盲肠病变记分按文献方法进行。 2 结果 2.1 攻毒到8d剖杀试验鸡的增重情况 平均增重1表示攻毒前免疫措施对试验鸡增重的影响,各组数值比较接近,没有明显差异,说明所采取的免疫措施对试验鸡增重无明显影响,DNA疫苗对鸡无毒副作用。 平均增重2表示从攻毒到第8 d剖杀时试验鸡的增重情况。攻毒后,柔嫩艾美球虫攻毒免疫组增重明显,与柔嫩艾美球虫攻毒未免疫对照组比较,差异显著(P0.05),相对增重率达97.17%,而巨型艾美球虫、堆形艾美球虫、毒害艾美球虫攻毒免疫试验组的相对增重率分别为81.85%、77.71%、71.49%,说明该DNA疫苗对柔嫩艾美球虫的攻击有完全免疫保护作用,对3个异种球虫的攻击具有部分免疫保护作用,其中巨型艾美球虫攻毒免疫试验组的增重略高于堆形艾美球虫、毒害艾美球虫攻毒免疫试验组(见表1)。 2.2 各组攻毒未免疫分组卵囊产量、盲肠病变评分及opg值比较 攻毒后第8 d,剖杀全部鸡,逐只取其盲肠,计算每克盲肠内容物卵囊数(OPG值)并确定盲肠病变值。巨型艾美球虫、堆形艾美球虫、毒害艾美球虫攻毒免疫试验组与相应的攻毒未免疫对照组的OPG值及盲肠病变值比较,差异显著(P0.05),柔嫩艾美球虫攻毒免疫组卵囊产量下降率达91.02%以上,巨型艾美球虫攻毒免疫组、堆形艾美球虫攻毒免疫组、毒害艾美球虫攻毒免疫组卵囊产量下降率分别达39.13%、38.78%、91.11%,说明此DNA疫苗对这几种球虫具有不同程度的免疫保护力,其中毒害艾美球虫攻毒免疫组卵囊产量下降率最大,与毒害艾美球虫攻毒未免疫对照组OPG值及盲肠病变记分比较,差异显著(P0.05,见表1)。 2.3 未免疫阳性对照组与虫指数检测 根据存活率、相对增重率、盲肠病变值和卵囊值等指标计算抗球虫指数(ACI)。柔嫩艾美球虫攻毒免疫组的抗球虫指数达到186.50,而未免疫阳性对照组为87.50,免疫保护效果明显。巨型艾美球虫、堆形艾美球虫、毒害艾美球虫攻毒免疫组的抗球虫指数分别为147.85、142.71、153.82,而相应的攻毒未免疫对照组分别为80.36、83.33、102.86,说明此疫苗对上述异种球虫具有部分免疫保护作用(见表2)。 3 球虫dna疫苗对艾美球虫的交叉免疫保护作用 用筛选的球虫种、株、重组抗原免疫接种鸡,能够在种间、株间产生交叉免疫保护作用。Tomley等用重组抗原CheY-SO7免疫雏鸡,发现CheY-SO7对柔嫩艾美球虫的攻击有保护作用,而且对堆形艾美球虫、巨型艾美球虫、毒害艾美球虫的攻击也有部分保护