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05%毛果芸香碱透明质酸钠缓释滴眼剂滴眼后眼的药代动力学研究 毛果碱滴眼液是治疗各种借此机会的眼绿植物不可或缺的药物之一。但该剂型滴眼后立即被结膜囊中的泪液稀释,并很快从泪道排出,因此生物利用度低,作用时间极为短暂,故需反复频繁滴眼,易发生局部毒性反应及患者依从性差等一系列问题。为延长毛果芸香碱滴眼液的作用时间,增强毛果芸香碱的眼内通透性及生物利用度,减少用药次数,降低毒性,提高疗效,笔者采用0.5%毛果芸香碱透明质酸钠缓释滴眼剂观察滴眼后眼部的药代动力学特征,并与1%毛果芸香碱滴眼液比较,评价其相对生物利用度。 材料和方法 一、 材料和制剂 1. 试剂 甲醇(加拿大Calendon公司产品);磷酸氢二钾(分析纯,西安化学试剂厂产品);二氯甲烷(分析纯,天津津宇精细化工厂产品)。 2. 实验药物 0.5%毛果芸香碱透明质酸钠缓释滴眼剂(山东正大福瑞达制药有限公司)。 3. %毛果芸香碱滴眼液的制备 精密称取硝酸毛果芸香碱粉(德国进口原料)1 g, 氯化钠0.68 g,羟苯乙酯0.03 g,加蒸馏水至100 ml,溶解,过滤,100℃流通蒸汽灭菌,配制成1%毛果芸香碱滴眼液。 二、 方法 1. 实验动物中心 健康白兔100只,雌雄兼用,体重2~3 kg ,河南省实验动物中心提供。随机分成20组,10个实验组,10个对照组,每组5只兔(10只眼)。 2. 家兔抗菌药的制备 用微量取样器分别给各实验组家兔双眼结膜囊内滴0.5%毛果芸香碱透明质酸钠缓释滴眼剂50 μl,给各对照组家兔双眼结膜囊内滴1%毛果芸香碱滴眼液50 μl。在给药后5、10、20、30、40、60、90、120、150及180 min,立即用1 ml注射器取房水,精密吸取每眼房水200 μl置带塞的离心管中。所有样品于-30℃下储存,以备测定。 3. 氯甲烷的组成 取房水200 μl,加二氯甲烷4 ml振荡2 min,离心3000 r/min×10 min;抽吸弃去上层水液,取有机层,50℃ 氮气流下挥发掉二氯甲烷;加入流动相200 μl(在90~180 min的房水样品中,加入流动相100 μl进行浓缩测定),振荡4 min溶解,离心4000 r/min ×10 min,取50 μl样品注入高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定仪中,以峰面积代入回归曲线,求得所测样品浓度。 4. 方法的线性范围、标准曲线和重现性 采用岛津LC-10A型HPLC测定仪。色谱条件:色谱柱为美国BDS公司生产的 Hypersil C18,粒度3 μm,100 mm×2 mm 。流动相:0.063 mol/L磷酸氢二钾-甲醇(89∶11);流速0.5 ml/ min,检测波长215 nm,柱温55℃,进样量50 μl,记录色谱图与峰面积,以外标法进行定量。将峰面积与对应浓度进行线性回归,标准溶液的浓度系列为0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、 2.00 和4.00 μg/ml,最低检测限为0.025 μg/ml。用0.25、0.50、1.00、2.00及4.00 μg/ml的标准溶液进行方法精密度和重现性观察;用0.25、1.00及4.00 μg/ml 3个浓度进行回收率测定。 5. 统计学处理 文中数据均采用3p87药代动力学软件进行统计学处理。实验组与对照组用药后不同时间房水中的药物浓度比较,采用成组配对t检验,以P0.05作为差异有显著意义标准。 结果 一、 一般情况下 0.5%毛果芸香碱透明质酸钠缓释滴眼剂与1%毛果芸香碱滴眼液滴眼后,各时间点均未出现兔眼结膜充血、水肿、流泪等刺激症状。 二、 干扰测定 毛果芸香碱的保留时间为6.6 min,杂质对测定无干扰。以峰面积对浓度进行线性回归,房水中毛果芸香碱的浓度在0.05~4.00 μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9999)。 三、 hplc方法的精度和重复性表1 四、 毛果贵族的回收率 表2显示兔眼房水中3种浓度毛果芸香碱的回收量及回收率,平均回收率为98.2%。 五、 药代动力学参数 分析 两组50 μl毛果芸香碱滴眼后不同时间房水中药物浓度见表3。实验组与对照组的药物达峰浓度(Cmax)分别为4.46 μg/ml和2.25 μg/ml,达峰时间(tmax)分别为10 min和20 min。用计算机进行拟合并计算出药代动力学参数(表4)。实验组与对照组的消除半衰期 (t1/2)分别为31.83 min和22.98 min,实验组的房水药物浓度-时间曲线下面积(AUC0~180)是对照组的1.75倍。实验组的达峰浓度是对照组的1.98倍(t=2.23,P0.05)。滴眼后2 h,实验组房水中的药物浓度仍高于对照组。 毛果芸香碱透明质酸钠缓释