pn眼用原位凝胶的制备及药效学评价.docxVIP

pn眼用原位凝胶的制备及药效学评价 硝酸钠（pn）作为一种治疗性蓝眼睛的药物已有100多年的历史。目前，主要的临床药物是水溶液。该剂型易被泪液稀释,并很快从泪道排出,从而使药物作用时间缩短,需频繁给药。为了延长其在眼部的滞留时间,前期研究曾在其滴眼液处方中添加增黏剂-壳聚糖,取得了较好的效果。本研究以离子敏感型材料海藻酸钠为胶凝剂,并用羟丙基甲基纤维素(hydroxy propyl methylcellulose,HPMC)为增黏剂,研制离子敏感型毛果芸香碱眼用原位凝胶,并对其药效学做初步考察。 1 药品、试剂和仪器 高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司,1100系列),pHS-25C pH酸度计(上海康仪仪器有限公司)。 PN滴眼剂(江苏省信诺医药对外贸易有限公司,批号:1017064),PN对照品(湖北省药品检验所,批号纯度:99.36%),HPMC(E15LV,E50LV,上海卡乐康包衣技术有限公司,批号,海藻酸钠(天津市远航化学品有限公司,批,乙腈(色谱纯,美国Tedia),其他试剂均为分析纯。 健康成年家兔,雌雄皆用,体重2.0～2.5 kg(武汉大学人民医院药学部动物中心)。 2 方法 2.1 mc的制备 通过预试验,拟定供筛选的基质组成,见表1。将处方量的海藻酸钠及HPMC在搅拌下加入适量注射用水中,另取羟苯乙酯(0.03%)溶于适量热水后加入,再加PN(1%),氯化钠(0.68%)使其溶解,加注射用水至足量搅匀,于100 ℃流通蒸气灭菌30 min,无菌分装即得。 2.2 重量测定pn的确定 2.2.1 流动相、水相、总氮含量 色谱柱: 美国Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-水(10∶90),水相含0.05%磷酸,用氢氧化钠调节pH 3～4;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:214 nm;进样量:20 μL;理论塔板数不低于10 000。 2.2.2 硝酸盐毛果芸香碱标准品溶液的线性回归分析 精密称取105 ℃干燥至恒重的硝酸毛果芸香碱对照品适量,用蒸馏水配成32 μg·mL-1标准储备液,分别取0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL储备液置10 mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,得0.64,1.28,1.92,2.56,3.20 μg·mL-1系列浓度对照品液,取20 μL进样,以峰面积值(Y)对浓度(C)进行线性回归,得回归方程Y=19.06C-0.55,r=0.999 9,表明硝酸毛果芸香碱在 0.64～3.2 μg·mL-1浓度范围内与峰面积线性关系良好。同时配制与1.92 μg·mL-1硝酸毛果芸香碱溶液浓度比例相当的空白辅料溶液(同时含海藻酸钠及HPMC),20 μL进样,结果表明辅料对含量测定无影响,见图1。 2.2.3 加样回收率试验 分别取高、中、低3 个浓度对照品溶液(3.0,2.0,1.0 μg·mL-1),按处方量加入相当浓度的辅料溶液,20 μL进样,测定峰面积值,以同浓度对照品溶液进样所得峰面积比计算回收率,结果高、中、低3个浓度的平均回收率分别为(99.86±0.16)%,(99.93±0.22)%,(99.90±0.32)%。 2.2.4 加样回收率试验 精密称取已知含量的PN凝胶10 mg,置100 mL量瓶中,分别加入对照品适量,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,分别进样检测,用测得值比上样品已知含量与对照品加入量之和,计算相对回收率,结果平均回收率为100.2%,RSD为0.5%。 2.2.5 精密度测试 取“2.2.3”项下中间浓度的溶液在同一天内连续测定5次,RSD为0.08%;连续测定3 d,RSD为0.29%。 2.2.6 样品稳定性测定 将“2.2.3”项下中间浓度的溶液放置于-20 ℃培养箱保存,分别于0,5,10 d取出测定,分别为1.988,1.992,1.999 μg·mL-1,浓度的波动经统计学处理无统计学意义,由此可见样品放置于-20 ℃保存10 d内稳定。 2.3 u3000不同热压的样品溶液在cacl23. 参照中国药典2005版二部释放度测定法(附录XD第三法),将网碟改成相应大小的圆盘。称取各处方的PN凝胶1.0 g,置于圆盘中(有效释药面积为5.72 cm2,厚度为2 mm),以赛璐芬膜为半透膜,释药面向上,将圆盘放入1 000 mL的溶出杯中,保持释药面向上,以500 mL模拟泪液(NaCl 6.7 g·L-1,NaHCO32.0 g·L-1,CaCl2·H2O 0.8 g·L-1)为溶剂,温度为(37±0.5)℃,转速为75 r·min-1。在0.5,1,2,3,4,5,6,7,8 h分别取样,每次10 mL,经0.45