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不同浓度碱水炮制对半夏毒性的影响 半夏是天南星科植物的三叶半夏（thunb）松弛剂。这是中医临床上最常用的有毒中药之一，具有止咳、去粘液、降压、止吐、消瘀、结粘液等功效。在历代中医药理论文献中,半夏均记载为有毒,其毒性主要表现为强烈的刺激性,若炮制不当或服用生品会对所接触的嘴唇、咽喉、口腔、胃肠道黏膜产生强烈的刺激性,导致针刺样的刺痛感和口舌肿胀、咽喉刺痛甚或失音,呕吐、腹泻等。为了使半夏的毒性降低,历代中医药文献均记载了炮制方法解其毒。汉代就有“汤洗数十度,令水清滑尽”,经过2 000多年的演变,现在半夏的炮制方法即为国家药典法,采用8%明矾水或pH12的碱水(如石灰水)浸泡半夏。在本课题组的前期研究中表明,生半夏中具有特殊晶型的不溶性草酸钙针晶含量与半夏的刺激性呈显著剂量相关,从生半夏中提取分离获得的纯草酸钙针晶对家兔眼结膜具有强烈的刺激性毒性;草酸钙针晶的浓度与刺激性强度呈典型的量效关系;去除草酸钙针晶的半夏粉末和半夏各种溶剂提取物对家兔眼结膜几乎没有刺激性,确定生半夏中的草酸钙针晶是生半夏的主要刺激性毒性成分。本研究通过实验阐明半夏炮制中采用8%明矾水或pH12的碱性溶液可以使半夏刺激性毒性降低的原因。 1 测定药材和试剂 生半夏、茜草、山药、麦冬均购置于江苏省药材公司,经本校鉴定教研室王春根教授鉴定分别为天南星科多年生草本植物三叶半夏P.ternanta的干燥块茎;茜草科植物茜草Rubia cordifolia的干燥根和根茎;薯蓣科植物薯蓣Dioscorea oppositaThunb.的干燥根茎,百合科植物麦冬Opjiopogon japonicus的干燥块根。上述药材均经粉碎成过40目筛的粉末备用。实验用试剂均为分析纯,实验用明矾由我校炮制教研室提供。 Nikon显微镜(日本),Leika倒置显微镜(德国),AMRAY-1840型扫描电镜(日本)。 2 方法和结果 2.18 浸泡温度对刺激成分的影响 取生半夏粉末适量,分成7份,按照药典方法分别加入8%明矾水(高温组、低温组);10% Na2CO3水溶液,pH12(高温组、低温组);5% Na2CO3水溶液,pH≈10(高温组、低温组)进行浸泡,高温组设置浸泡温度与暑天35 ℃左右气温相当,低温组浸泡温度与冬天0～5 ℃左右气温相当,浸泡的温度采用水浴恒温,以水浴的温度指示浸泡的温度;浸泡时间分别设置成高温组浸泡2 d,低温组浸泡1周(7 d),浸泡过程中每天搅拌5～7次,生半夏加入同样体积的自来水浸泡作为对照,浸泡温度同上。浸泡后将各样品粉末取出干燥,进行草酸钙含量测定,结果见表1。 表1结果表明,经过明矾水和不同浓度碱液浸泡后的半夏,其中刺激性成分草酸钙针晶的含量均有不同程度的降低。以8%明矾水35 ℃浸泡2 d和pH12的10% Na2CO3溶液35 ℃浸泡2 d的炮制工艺下降幅度最大,而在pH12的碱液浸泡,对刺激性成分含量的影响较小。说明炮制时的温度和碱液的pH对半夏刺激性成分的含量变化影响较大。 2.2 不同工艺的混悬液对家兔眼刺激性试验 取上述经过浸泡并干燥的各样品粉末适量,均粉碎成过200目筛的粉末,按照国家新药审评技术要求中刺激性实验的要求进行实验。取符合实验要求的家兔数只,每份样品用家兔眼6只,各样品用生理盐水配制成质量分数为10%的混悬液,临用时充分振摇混匀,每只兔眼给药2滴。给药后,轻轻使上下眼睑被动闭合5～10 s,使药液和眼充分接触,2 min后立即用40～50 mL生理盐水冲洗眼睛至眼中无任何异物,随后观察1.5～3 h内兔眼情况,按照相关评分标准记录并统计,同时拍照记录家兔眼的刺激性反应情况。结果见表2。 表2结果表明,经过不同工艺炮制后的半夏样品对家兔眼结膜的刺激性都有不同程度的降低,其中以清半夏、8%明矾水35 ℃室温浸泡2 d的半夏,pH12的碱液35 ℃室温浸泡2 d的半夏刺激性最低。从表1,2的结果可以看出,半夏中草酸钙针晶含量的降低与其刺激性降低具有良好的相关性,这与前期的研究结果一致。 2.3 草酸钙含量的测定 取生半夏各样品粉末和山药、麦冬、茜草药材粉末少量,按照文献记载的方法进行草酸钙含量的测定,结果分别为1.749%,0.084%,0.128%,5.250%。 结果表明,在选用的除半夏以外的其他药材中,茜草中含有高含量的草酸钙针晶,而山药和麦冬的草酸钙针晶的含量非常低。 2.4 草酸钙针晶的电镜观察 将半夏40目粉末的样品、生半夏经过超微粉碎成5 μm的粉末样品和山药、麦冬、茜草40目粉末的样品按照显微观察的要求,制备成水玻片在Nikon显微镜上进行观察,同时,将样品粉末用盖玻片制备成水玻片,标号,干燥,置干燥器中备用。将已经制备好的各样品粉末水玻片切割成3 mm2的小块,按照电子显微镜的要求镀膜并上镜台扫描观