微生物实验-PCR技术在细菌鉴定中的应用.pptxVIP

聚合酶链式反应 PCR Polymerase Chain Reaction; 1.熟悉PCR试验的原理、方法和实际应用及注意事项。 2.熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理、实验步骤及应用。;本质：是体外以2n-1方式快速扩增DNA的方法 ;变性：通过加热使模板DNA完全变性成为单链，同时使引物自身和引物之间的发荚结构或局部双链消除； 退火：将温度下降至适宜温度，使引物与模板DNA退火结合； 延伸：将温度升高，热稳定DNA聚合酶以dNTP为底物催化新生DNA链延伸。; 模板DNA 模板DNA是待扩增序列的核酸。基因组DNA、质粒DNA、噬菌体DNA、cDNA等都能作为PCR反应的模板。 特异性引物 引物是与靶DNA的3`端和5`端特异性结合的寡核苷酸片段。只有当每条引物都能特异性地与模板DNA中的靶序列形成稳定的结构，才能保证其特异性。;热稳定DNA聚合酶 延伸引物从而达到特异DNA片段指数增长的效果。保真度高、可扩增几个kb是现在热稳定DNA聚合酶发展的趋势。 dNTP 即dATP、dTTP、dGTP、dCTP。为引物延伸提供相应的材料。 二价阳离子 用Mg2+或Mn2+。游离的二价阳离子配合热稳定DNA聚合酶使引物能够发生延伸反应。;缓冲液 维持PCR反应体系的pH。常用Tris-HCl。 一价阳离子 50m