空气中细菌种类的测定.docxVIP

如果对你有帮助，请下载使用！ 培养基的制备与空气中微生物的检测 一、实验目的与要求 1、了解并掌握微生物所需的营养成分以及培养基的类型。 2、学习并掌握牛肉膏蛋白胨培养基的配制原理，配制方法以及熟悉实验步骤。 3、掌握高压蒸汽灭菌器的原理以及了解其操作步骤。 4、空气中微生物的检测。二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的 pH 值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升， 使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在 0.1MPa 的压力下，锅内温度达 121℃。在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。 三、实验内容 1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备。 2、高压灭菌。 3、空气中微生物的检测。四、实验步骤 1、查配方 牛肉膏蛋白胨培养基的配方：牛肉膏 1g；蛋白胨 2g；NaCl 1g；琼脂粉 4g； 蒸馏水 200mL；pH 7.0—7.2。 2、称量 3、配制 先将牛肉膏、蛋白胨溶入烧杯中搅拌至完全溶解，再加入其他成分一次溶解， 倒入 500mL 的锥形瓶中，加水至 200mL，加入琼脂粉，拿报纸封口。 4、高压灭菌 5、分装，凝固 6、暴露取样：在指定的地点：一楼、三楼、五楼、七楼各放 2 皿，将平板皿盖打开，在空气中暴露 10min，时间一到，立即合上皿盖。 7、培养观察：把培养皿置于生化培养箱培养，于 48h 后记录所生长的菌落数。 1 如果对你有帮助，请下载使用！ 8、计算 1 平方米空气中的微生物的数目。 奥梅染斯基曾建议：如面积为 100 ㎝ 2 的平板培养基，暴露在空气中 10 分钟，置于 37℃培养 24 小时后所生长的菌落数，相当于 10L 空气中的细菌数。 m3X 空气中的细菌数 m3 r5 ㎝N 5 分钟，置 37℃培养 24 r 5 ㎝ 五、实验数据记录及处理 测得各个楼层的菌落数如下表所示： 1 楼 1 楼 3 楼 5 楼 7 楼 外 6 11 5 5 2 内 3 16 6 13 3 按照上述公式，计算微生物的数目如下： 1 楼：X（外 1）=764（个） X（外 2）=1401（个） X（外平均）=1083（个） X（内 1）=382（个） X（内 2）=2038（个） X（内平均）=1210（个） 3 楼：X（外）=637（个） X（内）=764（个） 5 楼：X（外）=637（个） X（内）=1656（个） 7 楼：X（外）=255（个） X（内）=382（个） 由计算得出的数据可知，空气中微生物的分布具有不定向性以及不均匀。六、实验体会 1、微生物需要的营养物质 1、微生物需要的营养物质 营养物质应满足微生物的生长、繁殖和完成各种生理活动的需要。它们的作用可概括为形成结构（参与细胞组成）、提供能量和调节作用（构成酶的活性和物质运输系统）。微生物的营养物质有六大类要素，即水、碳源、氮源、无机盐、生长因子和能源。 ① 水：水是微生物的重要组成部分，在代谢中占有重要地位。水在细胞中有两种存在形式：结合水和游离水。结合水与溶质或其他分子结合在一起，很难加以利用。游离水（或称为非结合水）则可以被微生物利用。 ② 碳源：碳在细胞的干物质中约占50%，所以微生物对碳的需求最大。凡是作为微生物细胞结构或代谢产物中碳架来源的营养物质，称为碳源。作为微生物营养的碳源物质种类很多，从简单的无机物（CO2、碳酸盐）到复杂的有机含碳化合物（糖、糖的衍生物、脂类、醇类、有机酸、芳香化合物及各种含碳化合物等）。但不同微生物利用碳源的能力不同，假单孢菌属可利用90种以上的碳源，甲烷氧化菌仅利用两种有