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; 一、基因工程
(一)基因工程的概念及原理
1.概念:
基因拼接技术、DNA重组技术。
通过体外 DNA 重组和转基因技术,赋予生物新的遗传特性
2.原理:
基因重组;;;;;;;;;;;;4.目的基因的检测与鉴定
个体水平上的检测:抗虫、抗病鉴定。
检测:是否插入了目的基因:分子杂交技术
目的基因是否转录:分子杂交技术
目的基因是否翻译成蛋白质:抗原—抗体杂交
;;;;小试牛刀; 四、胚胎工程
(一)动物胚胎发育的基本过程
场所:睾丸的曲细精管
时期:初情期开始。
变形:细胞核-精子头,高尔基体-顶体,中心体-尾
线粒体-尾基部的线粒体鞘,其他物质-原生质滴向后脱落。;卵子的发生;1.受精作用
(1)定义
精子和卵子结合形成合子(即受精卵)的过程。
(2)场所
在输卵管中。
;(4)过程;受精过程:
(1)顶体反应:
形成精子穿越放射冠的通道
(2)透明带反应:
防止多精入卵受精的第一道屏障。
(3)卵细胞膜反应:
是防止多精入卵受精的第二道屏障。
;2.早期胚胎的发育;胚胎工程的理论基础; (二)胚胎工程的应用
1.胚胎移植
(1)概念
供体为优良品种,
作为受体的雌性动物应为常见或存量大的品种。
(2)胚胎移植的意义及地位
缩短了供体本身的繁殖周期
发挥雌性优良个体的繁殖能力。
;胚胎移植的生理学基础;胚胎移植的流程;小试牛刀; 2.胚胎分割
(1)概念
将早期胚胎切割 2 等份、4 等份等,经移植获得同卵双胎或多胎
(2)材料
发育良好,形态正常的桑椹胚或囊胚。
操作过程:内细胞团均等分割
;胚胎干细胞; (3)主要用途
①研究哺乳动物个体发生和发育规律;
②体外条件下研究细胞分化的理想材料
③治疗人类某些顽疾
④移植ES细胞可使坏死或退化的部位得以修复并恢复正常功能;
⑤用于器官移植
;当堂训练;; ; ;2.复性:
系统温度下降至50 ℃左右时,两种引物与两条单链DNA结合
3.延伸:
当系统温度上升至72 ℃左右,溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下,合成新的DNA链
; ; ;关于PCR的叙述,不正确的是( B )。
A.需要耐热DNA聚合酶
B.Taq酶催化DNA链合成的方向为3′→5′
C.应用PCR与探针杂交技术可以检测基因突变
D.新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板
; ; ; ; ; ;在“DNA的粗提取与鉴定”实验中,实验原理是利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同来提取的,DNA的溶解度与如图所示曲线的对应点相符合的是( B )。
A.a点浓度最适合析出DNA
B.b点浓度最适合析出DNA
C.c点浓度最适合析出DNA
D.d点浓度最适合析出DNA;下列各项中,实验操作与目的一致的是( )。
;下列实验材料或试剂的改变,对实验结果影响最小的是( C)。
A.用蒸馏水代替层析液进行叶绿体色素的分离
B.用斐林试剂代替甲基绿染色观察DNA的分布
C.用0.14mol/L NaCl代替2mol/L NaCl溶解DNA
D.用大蒜根尖代替洋葱根尖观察植物细胞有丝分裂
; ; 2.方法
(1)凝胶色谱法
;①原理
分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙,路程短,流动快
分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒的内部,路程长,流动慢
②凝胶材料
多孔性,多糖类化合物,如葡聚糖、琼脂糖
③分离过程
混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子;缓冲溶液:
(1)原理:由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成(如H2CO3-NaHCO3,HAc-NaAc,NaH2PO4-Na2HPO4等),调节酸和盐的用量,可配制不同pH的缓冲液。
(2)缓冲液作用:抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定;(2)电泳法:
①原理
不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同
②分离方法:琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳。
③分离过程:在一定pH下,使蛋白质基团带上正电或负电;加入带负电荷多的SDS,形成“蛋白质-SDS复合物”,使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。;; (1)样品处理
①红细胞的洗涤:
低速短时离心、生理盐水洗涤
②血红蛋白的释放:
在蒸馏水和甲苯作用下,红细胞破裂释放
③分离血红蛋白溶液:
中速长时离心
;分离血红蛋白溶液;(2)粗分离
透析:装入透析袋并置于磷酸缓冲液中(PH为7.0)12小时左右
(3)样品的纯化
调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质
(4)纯度鉴定
纯度鉴定—聚丙烯酰胺凝胶电泳;;;一、传统发酵技术的应用;;;;;(三)小试牛刀;;一、传统发酵技术的应用;(一)腐乳的
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