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不同硒源对牛消化道内酶活性的影响 在肿瘤胃，饲料中的碳通过微生物作用取代硫氨基酸中的硫，形成含铬氨基酸，并转化为细菌蛋白，形成含铬蛋白。此外，肿瘤胃微生物对硅的还原作用：氧化硅（se6-或se8-）通过还原到日粮中的硫或硫化疗（se2-）还原。瘤胃微生物对硒的代谢作用降低了硒的净吸收率和生物学利用率。牛吸收硒的主要部位在小肠和大肠, 硒主要以稳定的可溶性复合物 (如氨基酸形式的复合物) 形式吸收, 这就要求较好饲料硒源既能避开瘤胃的代谢, 同时在后肠道必须有较高的溶解度。为此, 本试验选择无机和有机共4种硒源, 通过体外模拟牛消化道内环境, 测定各种硒源在不同环境下的溶解度, 比较将其作为牛饲料的适宜硒源。 1 材料和方法 1.1 真胃内环境的测定 亚硒酸钠 (Na2Se O3·5H2O) , 分析纯化学试剂;赛乐硒 (Se-plex) , 饲料级啤酒酵母硒, 含硒1 mg/kg, 由美国ALLTECH公司提供;蛋氨酸硒为饲料级, 蛋氨酸硒含量≥5 800 mg/kg, 络合硒含量≥1 500 mg/kg, 由浙江建德维丰饲料兽药有限公司提供;包被硒 (Rumen by-pass Selenium) , 饲料级, 含硒4.30%, 为本课题组自行研制的过瘤胃硒。 模拟真胃酸性溶剂:用0.1%的盐酸 (p H值为2.3) 溶液模拟真胃内环境。 模拟瘤胃缓冲溶液:在早晨饲喂牛2 h后采集1 L其瘤胃液, 用4层沙布过滤, 在39℃水浴放置45 min, 然后1 500 r/min离心2 min, 取上清液在8 500 r/min离心20 min后将其沉淀置于0.5 L二氧化碳饱和磷酸盐缓冲溶液中, 取该溶液与p H值为7.3的缓冲液以1:1的比例混合模拟瘤胃内环境。缓冲液的配制方法如下:将1.75 g Na HCO3、0.6 g Na2HPO4、0.30 g KH2PO4、2.00 g Na Cl、2.00 g KCl、0.075 g Mg SO4、0.25 g Ca Cl2、1.00 g尿素、0.05 g葡萄糖、125μg VB12、5μg生物素用1 000 ml去离子水溶解, 预热到39℃, 通入二氧化碳直至澄清为止。 1.2 模拟溶剂和模拟瘤胃缓冲液配制 按每100 ml溶剂加入硒1.5 mg, 分别计算并准确称取各种硒源, 加入到100 ml去离子水、模拟真胃酸性溶剂和模拟瘤胃缓冲溶液中, 在保持39℃水浴振荡 (WMK-10型恒温温度控制器) 的条件下, 在去离子水中溶解24 h, 在瘤胃缓冲液和0.1%的盐酸中各自分别溶解1、3和24 h。每种溶剂不同时间点各做5个重复。溶解结束后, 定量滤纸过滤。采用比色法测定滤液硒浓度。 1.3 数据的统计分析 试验数据应用SPSS10.0统计分析软件的Oneway-Anova进行方差分析和LSD多重比较。 2 模拟真胃环境酸性溶剂对亚硒酸钠和蛋氨酸硒的溶解 由表1可知, 在去离子水中24 h的亚硒酸钠和蛋氨酸硒溶解度显著高于赛乐硒, 包被硒显著低于赛乐硒 (P0.05) 。在模拟瘤胃缓冲液中, 1 h时, 亚硒酸钠溶解度最高, 其次为蛋氨酸硒, 再次是赛乐硒, 包被硒最低, 各组间差异显著 (P0.05) ;3 h时, 溶解度最大的为亚硒酸钠, 其余由大到小依次为蛋氨酸硒、赛乐硒和包被硒 (P0.05) ;24 h时, 亚硒酸钠和蛋氨酸硒无差异 (P0.05) , 均显著高于赛乐硒, 包被硒显著低于赛乐硒 (P0.05) 。在模拟真胃环境酸性溶剂中, 1 h时, 蛋氨酸硒全部溶解, 显著高于其它硒源 (P0.05) , 其它硒源间差异不显著 (P0.05) ;在3 h和24 h时, 各种硒源的溶解度无显著差异 (P0.05) , 蛋氨酸硒全部溶解。 3 壳氨酸硒在模拟瘤胃和真胃中的溶解度差异 研究发现, 瘤胃微生物对硒的代谢作用降低了硒的生物学利用率, 使硒的净吸收率显著降低。用含硒的反刍动物粪便种植牧草, 75 d后只有0.3%的硒进入植物体内, 说明经反刍动物瘤胃微生物作用后, 硒的利用率降低。Serra等用Na2Se O3和瘤胃细菌硒饲喂小鼠, 结果饲喂细菌硒使小鼠肝脏和肾脏中硒含量显著降低, 说明瘤胃细菌硒的生物学利用率低于Na2Se O3。从本试验结果可以看出, 亚硒酸钠在模拟真胃环境中溶解度很高, 其在瘤胃环境下的溶解度也较高, 解离速度快, 维持时间短, 易于氧化;而包被硒在瘤胃环境中的溶解度较低, 而在真胃的溶解度较高, 可以降低解离速度, 使硒缓慢释放, 也可避免硒对瘤胃微生物的负面影响, 从而提高了硒的消化和利用率。 蛋氨酸硒是螯合硒, 是硒离子 (螯合物形成体) 和蛋氨酸 (配位体) 配合而成的一种稳定的、电中性的、具有环状结构的配合物。Heinrich和