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妇炎消胶囊质量标准的研究 妇炎消胶囊是用原料天花粉、大黄、牡丹皮、苍术、黑药七味散剂制成的胶囊。具有清热解毒、益气、化瘀、除湿止痒等功效。本研究在现行标准 ( 编号WS-10265 ( ZD-0265) -2002-2011Z) 基础上, 建立了败酱草的薄层色谱鉴别; 建立了大黄的含量测定, 增加有效成分大黄酚的测定, 控制总蒽醌 ( 大黄素和大黄酚) 的含量; 建立了牡丹皮的含量测定, 采用HPLC法进行芍药苷的含量测定, 经方法学验证, 所建方法准确可靠, 适用于妇炎消胶囊的质量控制。 1 仪器和试剂盒 1.1 高效液相色谱仪 Waters 2695高效液相色谱仪, Agilent 1200高效液相色谱仪, 岛津LC-20A高效液相色谱仪, Mettler 105XS电子天平。 1.2 对照品的制备 大黄素 ( 批号110756-200110) 、大黄酚 ( 批号110796-201017) 、芍药苷 ( 批号110736-200934) 对照品均由中国食品药品检定研究院提供, 均为含量测定用; 妇炎消胶囊 ( 生产企业提供, 批 ; 甲醇、乙腈为色谱纯, 其余试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 阴性对照溶液的制备 参考文献建立方法。取供试品内容物4 g, 加1 mol·L- 1硫酸溶液20 m L, 加热回流2 h, 放冷, 用5 mol·L- 1氢氧化钠溶液调节p H值至7, 加三氯甲烷振摇提取2次, 每次20 m L, 合并三氯甲烷提取液, 蒸干, 残渣加无水乙醇5 m L使溶解, 作为供试品溶液。另取败酱草对照药材5 g, 加水50 m L, 加热回流1 h, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加1 mol·L- 1硫酸溶液20 m L, 同法制成对照药材溶液。再取缺败酱草的阴性样品 ( 按处方比例工艺制备) 同法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法 ( 《中国药典》2010年版一部附录ⅥB) 试验, 吸取对照药材溶液5μL, 供试品溶液及阴性对照溶液各3μL, 分别点于同一硅胶G薄层板上, 以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸 ( 10∶3∶1∶0. 4) 的上层溶液为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以10% 硫酸乙醇溶液, 在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应的位置上, 显相同颜色的斑点, 缺败酱草阴性对照无干扰。见图1。 2.2 大黄素、天麻酚的检测 2. 2. 1色谱条件色谱柱为Zorbax Eclipse XDBC18( 4. 6 mm×150 mm, 5μm) ; 流动相为甲醇-0. 1%磷酸溶液 ( 70∶30) ; 检测波长254 nm; 流量1. 0 m L·min- 1; 柱温30℃; 进样量10μL。理论板数按大黄酚峰计算应不低于3000。 2. 2. 2对照品溶液的制备取大黄酚、大黄素对照品适量, 精密称定, 加甲醇制成每1 m L含大黄酚20μg, 大黄素8μg的混合溶液, 即得。 2. 2. 3供试品溶液的制备取供试品装量差异项下的内容物, 研细, 取0. 5 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入乙醇-盐酸 ( 10∶1) 的混合溶液25m L, 称定重量, 置80℃水浴中加热回流1 h, 放冷, 再称定重量, 用乙醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过。精密量取续滤液2 m L, 置5 m L量瓶中, 加2% 氢氧化钠溶液1 m L, 加甲醇至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。 2. 2. 4专属性试验按处方和工艺制备缺大黄的阴性样品, 照“2. 2. 3”项下方法制备阴性对照溶液。取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液, 依法测定。结果阴性对照色谱中, 在与大黄素、大黄酚对照品相同保留时间的位置无色谱峰。见图2。 2. 2. 5 线性关系考察 取大黄素、大黄酚对照品混合溶液 ( 浓度分别为 8. 048 μg· mL - 1, 26. 20 μg·mL - 1) , 依法进样1, 5, 10, 15, 20, 25μL。以峰面积与进样量作 线性回归, 结果大黄 素在0. 0080 ~0. 2012μg范围线性良好, 线性方程为Y = 3607. 3X- 4. 6045 ( r = 1. 0000 ) ; 大黄酚在0. 0262 ~ 0. 6550μg范围线性 良好, 线性方程 为Y = 5321. 2X 23. 632 ( r = 1. 0000) 。 2. 2. 6重复性试验取同一批供试品6份, 依法测定, 结果大黄素、大黄酚总含量分别为1. 012 mg·g- 1, 2. 396 mg·g- 1, 3. 409 mg·g- 1, 其RSD分别为3. 4% 、2. 8% 、2. 5% , 结果