棕榈油脂肪粉包被赖氨酸的瘤胃降解率及小肠释放率.docxVIP

棕榈油脂肪粉包被赖氨酸的瘤胃降解率及小肠释放率 氨基酸对肿瘤的保护技术是近年来的热点。理想的修复产品不仅需要肿瘤胃的高稳定性，还需要完全释放和吸收真正的胃和肠道。本研究利用瘤胃尼龙袋法和小肠运动尼龙袋法分别测定了不同比例棕榈油脂肪粉包被赖氨酸在瘤胃的降解率和小肠的释放率,旨在探讨棕榈油脂肪粉与赖氨酸的理想包被比例,从而为保护性赖氨酸的生产提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 包装材料 氨基酸包被材料利用棕榈油脂肪粉,其瘤胃降解率为0.68%,小肠吸收率为51.40%,熔点55℃,脂肪酸组成见表1。 1.2 保护性氨基酸的制备 在L-赖氨酸盐酸盐中分别按30%、40%、50%和60%比例加入溶化后的棕榈油脂肪粉,边加边搅拌,在搅拌过程中迅速冷却,得到粉末状保护性赖氨酸:保护性赖氨酸Ⅰ(RPLys-Ⅰ)、保护性赖氨酸Ⅱ(RPLys-Ⅱ)、保护性赖氨酸Ⅲ(RPLys-Ⅲ)和保护性赖氨酸Ⅳ(RPLys-Ⅳ)。 1.3 动物实验 选择3头年龄4岁左右、体重约450kg的健康荷斯坦牛,安装永久性瘤胃瘘管和十二指肠前端瘘管,供试验使用。 1.4 试验日粮和营养水平 按每头奶牛每天采食量配制TMR全混合日粮。试验日粮及营养水平见表2,混合精料组成见表3。 1.5 测量设计和方法 1.5.1 瘤胃内取样塑料管 试验时每个瘤胃尼龙袋装待测保护性氨基酸样品4g,每4袋(分别装有不同的保护性氨基酸)系在一根长50cm的半软塑料管上,一次放6根管,共24个袋,于晨饲时放入瘤胃,塑料管的另一端固定在瘤胃瘘管盖上。 取样时间:在瘤胃内放置2h、6h、12h、24h、36h、48h各取出一个塑料管,每一种保护性氨基酸每个时间点4个重复,取出后放入洗衣机内(中速)冲洗8min,中间换水一次。将尼龙袋从管上取下,放入40℃烘箱内,烘至恒重(约48h),备测。 1.5.2 工真液的制备 将0.4g保护性赖氨酸样品装入十二指肠尼龙袋中,热压封口机封口,经瘤胃处理48h后,用人工真胃液(250m L 0.2mol/L的KCl与53m L 0.2mol/L的HCl混合后,用蒸馏水定容至1 000m L)在39℃处理3h后,投入十二指肠前端瘘管中,从粪中收集,放入洗衣机内(中洗)冲洗8min,中间换水一次。然后放入40℃烘箱内,烘至恒重,备测。 1.5.3 l-氨基酸盐酸盐系的测定 瘤胃和小肠处理残渣中赖氨酸含量按下述方法进行:试样预先在105℃烘箱内干燥至恒重,准确称取试样0.2g左右(精确至0.000 2g),加入3m L甲酸和50m L冰乙酸,再加入5m L 60g/L的乙酸汞冰乙酸溶液,加入10滴α-萘酚苯基甲醇指示剂,用高氯酸冰乙酸标准溶液滴定至溶液由橙黄色变为黄绿色,即为滴定终点。用同样方法另做空白试验进行校正。 L-赖氨酸盐酸盐含量计算公式如下: 式中:c为高氯酸冰乙酸标准溶液的浓度,mol/L;V为滴定试样消耗高氯酸冰乙酸标准溶液的体积,m L;V0为空白试验消耗高氯酸冰乙酸标准溶液的体积,m L;m为试样质量,g;0.09132为每毫摩尔赖氨酸盐酸盐的质量,g。 1.6 数据的统计和处理 试验数据先用Excel进行处理后,再用SPSS软件ANOVA单因子分类进行方差分析,LSD法进行多重比较。 2 结果与分析 2.1 包被赖氨酸和各调节物质的降解 赖氨酸和保护性赖氨酸的瘤胃降解率详见表4。表4表明,L-赖氨酸盐酸盐瘤胃内2h的降解率即高达80%左右,6h后全部降解。包被赖氨酸与赖氨酸的降解率差异极显著(P0.01)。RPLys-Ⅰ与其余3种差异显著(P0.05);RPLys-Ⅱ与RPLys-Ⅲ和RPLys-Ⅳ差异均显著(P0.05);但RPLys-Ⅲ与RPLys-Ⅳ之间差异不显著(P0.05)。这说明50%的过瘤胃脂肪添加量对赖氨酸已基本包被完全。 2.2 各保护性氨基酸生 不同保护性赖氨酸的小肠释放率,根据在小肠停留时间的不同划分时间段统计分析,见表5。 由表5可见,随着小肠内停留时间的延长,各种保护性赖氨酸的小肠消失率呈线性增加,不同保护性赖氨酸之间的差异也逐渐增大。6~12h,RPLys-Ⅰ和RPLys-Ⅱ与RPLys-Ⅲ和RPLys-Ⅳ差异显著(P0.05);12h以后,RPLys-Ⅰ与其余3种差异极显著(P0.01),RPLys-Ⅱ和RPLys-Ⅲ差异不显著(P0.05),但与RPLys-Ⅳ差异显著(P0.05)。其中,RPLys-IV在小肠停留24h后的消失率平均仅为54.80%,这说明棕榈油脂肪粉添加比例到60%时有保护过度的倾向。 3 讨论 3.1 动物油包被蛋氨酸的消失率和降解率 斯钦研究表明,棕榈油包被蛋氨酸和动物油包被蛋氨酸在人工唾液中消化6h的释放率分别为8.13%和11.89%,12h的释放率分别为8.69%和12.09%,