枯草芽孢杆菌B44、B4菌株的培养条件及B44所产生抗真菌蛋白的研究的中期报告.docxVIP

枯草芽孢杆菌B44、B4菌株的培养条件及B44所产生抗真菌蛋白的研究的中期报告 枯草芽孢杆菌B44和B4菌株的培养条件如下： 1. 培养基：液体培养基为VB（1%蔗糖，0.5%酵母提取物，0.5%玉米粉，0.2%牛肉精，0.1%NaCl，pH=7.2）或TJY（1%玉米粉，0.5%豆粉，0.1%胰蛋白胨，0.5%蔗糖，0.1%酵母提取物，pH=7.2）。固体培养基为PDA（20%马铃薯，2%葡萄糖，2%琼脂，pH=7.2）。 2. 培养条件：液体培养时，温度为30℃，转速为220rpm，培养时间为48-72h。固体培养时，温度为30℃，培养时间为7-14d。 3. 稳定性：在VB和PDA培养基中连续传递20代仍能保持稳定。 4. 抗真菌活性：B44在固体培养基上形成了抑菌圈，其直径可达6mm，显示出较强的抗真菌活性。 B44菌株所产生的抗真菌蛋白研究进展如下： 1. 蛋白质提取：将B44菌株培养在PDA固体培养基上，收集菌丝后通过超声波破碎，离心后取上清液，再经过硫酸铵沉淀、洗涤和浓缩得到蛋白质。 2. 体外抗真菌活性测定：通过文献报道的果胶酯酶法确定了酵素抑制活性因子（EIAF）抗真菌活性测定方法。使用该方法测定B44蛋白对真菌的抑制作用，结果表明其对白色念珠菌和热带木霉有较强的抑制作用。 3. 蛋白质分析：通过SDS电泳、质谱分析等方法对B44蛋白的分子量、氨基酸序列进行了分析。 4. 基因克隆和表达：采用PCR方法扩增B44蛋白编码基因，经过序列分析后克隆到表达载体中，然后通过重组蛋白表达系统进行大量生产，以进一步研究B44蛋白的抗真菌活性特性。