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hbvdnac启动子三链结构的高并联寡核苷酸链的合成与鉴定 一些准分酸不仅可以通过与互补链核的结合形成双链结构，还可以通过与双链核中含有丰富酪氨酸酸（同构酪氨酸酸）的区域，特征法将其结合成三链结构。这种能形成三链结构的寡核苷酸(Triple helix-forming oligonucleotide,TFO)通过Hoogsteen或逆Hoogsteen氢键与双链靶DNA同聚嘌呤区相互作用,缠绕于DNA的深沟内,并可阻止靶DNA与核酸聚合酶、转录因子等蛋白结合,抑制靶基因复制和表达。TFO使人工调控特定基因表达成为可能,为难治性DNA病毒感染的治疗展示了一个新的方向。鉴于目前尚无根治乙型肝炎病毒感染的理想药物,本实验设计多种理论上有可能与HBV-DNA C启动子区序列形成三链结构的TFO,观察其与HBV-DNA C启动子区序列结合的亲和性、特异性、筛选最佳TFO,为进一步的HBV基因转录抑制实验奠定基础,探索治疗HBV感染的新方法。 1 材料和方法 1.1 准分酸的合成 在Gibco BRL公司以亚磷酰胺三脂固相法合成图1所示的脱氧寡核苷酸,经C-18反相柱、聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化。 1.2 寡核苷酸的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 分别取两对上述合成的互补寡核苷酸(Target1和Target2)的正链和副链各500 pmol,混合,加5 mol/L NaCl 4 μl、无菌超纯水84