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不同浓度dmp对异育银鲫肠酶活性的影响 甲基丙酸铵（mt）是一种广泛存在于海洋藻类和其他淡水生物中的含硫有机物。DMPT对多种海、淡水鱼类及虾的生长、摄食均有不同程度的促进作用,并且能提高饲料利用率,增强鱼对不良环境的抵抗力。Nakajima通过研究发现,在配合饲料、半天然饵料和天然饵料中添加1 mmol/L DMPT,可使鲤鱼和鲫鱼摄食频率提高0.3～0.6倍;Nakajima的研究结果表明,饲料中添加5 mmol/L DMPT 使真鲷和牙鲆的增重率比对照组分别提高了2.5和1.3倍。另外,DMPT还能提高鱼的抗高温和缺氧能力,增强鱼类对水环境变化的忍耐力,以及促进虾的脱壳和生长。然而,对DMPT促进鱼虾生长与提高饲料利用率的相关机理的研究还较少,本试验通过研究饲料中添加DMPT对异育银鲫肠道消化酶活性的影响,以探讨DMPT提高饲料利用率与促进鱼虾生长的作用机制。 1 材料和方法 1.1 试验饵料的投喂 异育银鲫购自南京市水产研究所试验基地,体重(66.4±8.3)g。暂养10 d后随机分成5组(4个试验组,1个对照组;每组90尾鱼,3个重复),投喂不同的试验饵料。试验1～4组的试验饵料分别为在基础饵料(含30.46%粗蛋白质)中添加0.01%、0.02%、0.03%、0.04%DMPT,以投喂基础饵料为对照组。 试验鱼饲养于室内18个水族箱(90 cm×55 cm×60 cm)中,24 h增氧,水温22～28 ℃,投饵量为鱼体重的3%～4%,并根据摄食情况调整投饵量和投喂次数。 1.2 样品采集及分组 连续投喂试验饵料20 d后,空腹1 d,于第22 d上午开始采样,第1次采样后投喂饲料至饱食,以后每 3 h 采集1次样品,共采集5次样品,每次每箱随机采集3尾鱼。取异育银鲫全肠,在预冷的生理盐水中漂洗,除去内容物及血液,滤纸拭干,按长度均匀分为前肠、中肠和后肠,分别称重。将前肠、中肠和后肠用剪刀剪碎分别放入玻璃匀浆器(20 ml)中,并加入10 ml冷生理盐水,研磨6～8 min,使组织匀浆化,后倾入离心管中,3 000 r/min离心15 min,取上清液,-20 ℃保存,待用。 1.3 测定消化酶活性 淀粉酶、脂肪酶活性用相应试剂盒(购自南京建成生物工程研究所)测定。蛋白酶活性的测定用福林-酚试剂法。 1.4 处理数据 数据用SPSS11.0软件进行统计分析,不同处理组数据间的差异性在方差分析后进行多重比较。 2 结果 2.1 肠淀粉酶的活性 饲喂DMPT后异育银鲫肠淀粉酶活性的动态变化如表1所示。在空腹状态下,各处理组之间前肠、中肠和后肠淀粉酶活性均表现出显著差异(P0.05),并以添加0.03% DMPT组最高,显著高于其他各组;饱食后,肠淀粉酶活性出现先降低、后升高、再降低的波浪型变化趋势,饱食后3 h的淀粉酶活性降至谷值,峰值出现在9 h,至12 h时肠淀粉酶活性恢复至空腹时的状态。在各时间点,添加0.03% DMPT组肠淀粉酶活性都为最高,对照组为最低,且除饱食后6 h的后肠外,添加0.03% DMPT组淀粉酶活性均显著高于对照组(P0.05)。比较前肠、中肠和后肠淀粉酶活性,可以发现中肠淀粉酶活性最高,而后肠最低。 2.2 各组肠蛋白酶活性的比较 饲喂DMPT后异育银鲫肠蛋白酶活性的动态变化如表2所示。在空腹状态下,添加0.03% DMPT组肠蛋白酶活性最高,其中中肠和后肠蛋白酶活性显著高于对照组(P0.05);饱食后各处理组肠蛋白酶活性均出现类似于肠淀粉酶活性的变化趋势,饱食后3 h和9 h时的酶活性分别为谷值和峰值。比较试验各组肠蛋白酶活性后发现,添加0.03% DMPT组活性最高,对照组活性最低,且除空腹时的前肠外,添加0.03% DMPT组蛋白酶活性都显著高于对照组(P0.05)。比较前肠、中肠和后肠蛋白酶活性后可见,中肠蛋白酶活性最高,后肠最低。 2.3 dmpt对小鼠肠脂肪酶活性的影响 DMPT对异育银鲫肠脂肪酶活性的影响及饱食后肠脂肪酶活性的动态变化如表3所示。在空腹及饱食后12 h时,肠脂肪酶活性各处理组之间均无显著差异(P0.05)。饱食后3 h,肠脂肪酶活性无明显变化,后逐步升高,至9 h肠脂肪酶活性达到峰值,至12 h恢复至空腹时的状态。比较处理各组脂肪酶活性,添加0.03% DMPT组同样为最高,对照组也同样为最低,除前肠3 h与中肠9 h的脂肪酶活性外,添加0.03% DMPT组均显著高于对照组(P0.05)。比较前肠、中肠和后肠脂肪酶活性,后肠脂肪酶活性最高,而前肠最低。 3 不同饲料对鱼肠消化酶活性的影响 鱼类消化酶的研究一直是鱼类消化生理的重要研究内容。异育银鲫为鲤科无胃鱼类,其食道与肠直接相通,肠是营养物质消化吸收的主要场所,肠道中的消化酶主要来源于肠组织粘膜的分泌以及肝