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梨品种花粉管生长特性观察 授粉和提取物是开花植物具有性生殖过程的重要阶段，包括从花粉到头部的过程，花粉管进入胚囊，然后完成双重提取物和合子创造。这个过程是否成功取决于花粉和雌花之间的识别关系。通常芸薹属植物等孢子体型自交不亲和性植物的花粉不能在柱头上萌发或不能穿过柱头, 而梨、苹果等蔷薇科植物是典型的配子体型自交不亲和性植物, 自花或异花授粉的花粉均能在柱头上萌发、穿过柱头, 但在沿花柱向子房生长途中自花授粉的花粉管将被抑制而停止生长。已有研究表明, 自花花粉管在花柱内停止生长是由于花柱内自交不亲和性基因 (S基因) 所表达的S-RNase分解了自花花粉管RNA而抑制了花粉管生长, 花粉管无法进入胚囊完成受精, 而导致自花授粉不结实。许多育种专家利用蕾期授粉能够获得自花授粉的种子的方法来获取自交不亲和性植物的自交后代, 也就是说, 蕾期授粉能够克服一些植物的自交不亲和性, 但这种蕾期授粉能结籽的原因还不太清楚, 可能是由于此期S基因在雌蕊中的表达量少或不表达, 使得未成熟的雌蕊人工自花授粉后可以结实 (子) 。一些学者还提出开花后几天的S-RNase含量下降, 因而延迟授粉也表现较强的亲和性。为了进一步阐明蕾期授粉或延迟授粉能够获得自交后代的机制, 我们以沙梨 (Pyrus pyrifolia) 为试材, 对不同花龄的梨花进行授粉, 应用荧光显微镜观察了不同花龄花柱自花、异花授粉后花粉萌发及其在花柱内的生长动态以及花粉管自身的形态变化, 并与田间授粉的结果进行了比较分析, 以便从不同角度为阐明蕾期授粉能够克服自交不亲和性提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 培养和贮藏 2003年3月上旬在高邮市果树实验场品种园采集丰水和菊水含饱满花芽的健壮枝条, 室内培养并催花, 采集花粉, 贮藏备用。另采集丰水和菊水健壮含饱满花芽的枝条, 室内培养备用。 1.2 方法 1.2.1 丰水、菊水的授粉 分别对开花6、4、2 d前及当天即将开花 (散粉前) 的丰水和菊水的花蕾进行去雄, 同时疏去一些生长较弱的花蕾, 长度50 cm左右的花枝保留花蕾约20个, 然后分别进行丰水、菊水的自花及丰水×菊水的异花授粉, 同时将开花当天去雄并隔离的花柱在花后2、4 d进行丰水、菊水自花及丰水×菊水的异花授粉, 授粉后立即套袋。授粉时间为上午9至11时, 每个处理重复15朵花以上。授粉后在25℃光照培养箱中培养, 分别于12、24、48、72、96 h切取各处理花朵的花柱, 用FAA固定液固定。花柱的压片参照Kho等的方法, 同时对花柱的软化处理作一些调整, 而后用荧光显微镜观察花粉在柱头上原位萌发和花粉管生长情况, 每个处理重复3次。 1.2.2 授粉前处理及授粉 2004年3月分别于南京市傅家边果林场和高邮市果树实验场进行田间授粉, 授粉前处理及授粉同室内观察处理, 每个处理重复200朵花, 授粉后1周去袋, 1个月后统计坐果率。 2 结果与分析 2.1 花粉管生长情况 丰水自花授粉花粉管生长情况如表1~3所示, 虽然不同时期授粉后到达花柱上部、中部和下部的花粉管数量表现为上部较多、中部较少、下部最少的梯度分布, 但蕾期自花授粉和延迟自花授粉都表现一定的亲和性, 以开花4 d前的蕾期授粉效果最好, 这一时期生长到花柱基部的花粉管数量最多, 其次为开花4 d后的延迟授粉, 如自花授粉后96 h, 丰水开花当天自花授粉到达花柱基部的花粉管数为0根, 而开花4 d前的蕾期自花授粉平均有8.35根花粉管到达花柱基部, 占花粉管总数的7.38%, 开花4 d后的延迟授粉有5.64根花粉管到达花柱基部, 占花粉管总数的5.54%。其余的蕾期授粉和延迟授粉的亲和性较当天授粉也都有了一定的提高。开花6 d前的花粉附着量比较小, 约为50粒, 其它花粉附着量都比较大, 超过100粒, 通过观察发现此时花粉量已足够引起“群体效应”。花粉管生长早期以延迟授粉和成熟花授粉花粉管生长较快, 如在授粉后12 h, 蕾期授粉没有1根花粉管生长到柱头下1/3处, 而成熟花授粉和延迟授粉都有一定量的花粉管生长到达此处, 特别是丰水开花4 d后的延迟自花授粉平均有70.8根花粉管生长到柱头下1/3处, 并且平均有7.4根生长到花柱中部, 2者分别占花粉管总数的42.5%和4.4%。蕾期授粉在后一阶段又表现较快的生长速度, 如授粉后48 h, 开花6 d前的蕾期授粉在花柱基部开始出现一定量的花粉管, 平均为2.14根, 到达花柱基部的花粉管数增长也较快, 最后, 各花龄授粉到达花柱基部所需时间差别不是很大。 蕾期和延迟授粉对菊水自花授粉花粉管生长的影响与丰水类似, 如表1~3和图1所示。区别主要表现在以下几个方面:首先, 大多数同花龄授粉组合在相同的时间里, 菊水自花授粉到达花柱基部的花