标本溶血、储存时间及温度对乙肝病毒DNA生化检测的结果影响分析.docVIP

标本溶血、储存时间及温度对乙肝病毒DNA生化检测的结果影响分析 目的：分析不同的储存时间、温度以及标本是否溶血对乙肝病毒DNA进行荧光定量测量结果的影响。方法：选取笔者所在医院患有乙肝大三阳患者的血清标本分三种情况处理，一种抽取后马上检测，一种在4 ℃的温度下放置5～7 d检测，一种在常温下放置2 d即48 h后检测，标本溶血和未溶血的也分两组进行乙肝病毒DNA荧光定量PCR测量，所有实验结果进行统计学处理。结果：所有实验病例乙肝病毒DNA荧光定量测量结果中，溶血和未溶血血清标本的乙肝病毒DNA数量处于同等级别。抽取后检测、4 ℃的温度下放置5～7 d检测和在常温下放置2 d检测的乙肝病毒DNA数量无明显差异（P0.05）。结论：不同的储存时间、温度以及标本是否溶血对乙肝病毒DNA进行荧光定量测量的结果无影响。 标签： 乙肝病毒DNA； 荧光定量PCR； 标本 在实验室检查中，乙肝患者通常通过定量测量乙型肝炎病毒即HBV-DNA来获知乙肝病毒的复制是否活跃，从而来指导乙肝患者临床诊治、用药和预后评价[1]。临床广泛用于乙肝辅助诊断的聚合酶链反应（PCR）技术是一种分子生物学的诊断技术，它具有高敏感性的优势，可用来检测乙肝病毒DNA的含量[2]。PCR检测的测量重复性及准确性在实践中受到多种因素的影响，包括PCR本身扩增因素还有与标本相关的各种因素[3]。本组选取笔者所在医院患者的乙肝大三阳血清标本就标本溶血、储存时间和温度方面进行乙肝病毒DNA（HBV-DNA）荧光定量PCR，从而比较分析以上因素对HBV-DNA定量测定结果有无影响，为临床HBV-DNA定量检测提高准确性提供依据。 1 资料与方法 1.1 一般资料 收集笔者所在医院门诊9份乙肝大三阳患者的血液，每个人的血液样本分别装于两支试管，一支试管用震荡法制备溶血血清，并通过血液分析仪上测定其中含有的血红蛋白量，一支试管用直接法进行血清的制备。 1.2 仪器及试剂 实时荧光定量PCR检测系统（美国产MJ RESEARCH实时荧光基因扩增诊断仪）；HBV-DNA荧光定量试剂盒（深圳匹基生物技术开发有限公司，试剂盒最低检测限1000拷贝/ml）；血红蛋白测定用日本Sysmes K6000血液分析仪测定。 1.3 方法 将在门诊采集的9例乙肝并且乙肝两对半检测为大三阳患者的血液制备成的血清标本，每人份用两支试管分装。进行即刻检测、常温放置2 d后检测和在4 ℃放置5～7 d内检测。将每份血清标本（包括溶血及没有溶血的标本）制成模板，然后在模版中加入荧光定量检测的反应液，上机作乙肝病毒DNA的定量检测。 1.4 统计学处理 本文采用SPSS 11.0统计学软件对数据进行统计分析，计量资料采用配对t检验，P＜0.5表示差异有统计学意义。 2 结果 2.1 溶血标本对HBV-DNA测定的影响 溶血标本的溶血程度可以通过测量血红蛋白量来获知，Hb0.05）。见表1。 2.2 标本不同储存时间和温度对HBV-DNA测定的影响 把所有血清标本常温下放置2 d、4 ℃放置5～7 d检测和即刻测量的结果组间分别进行比较，差异无统计学意义（P0.05）。见表2。 3 讨论 乙肝病毒DNA（HBV-DNA）荧光定量PCR对乙肝的临床诊断具有重要价值，影响PCR的众多因素中，标本因素的影响不可忽视。其中，标本溶血是日常临床生化工作中经常遇到的一种现象[4]，除了常见的红细胞破坏外，血小板、白细胞等血细胞破坏所释放的某些细胞内成分也可影响临床生化指标的测定[5]。理论上，溶血血清标本会对HBV-DNA的定量检测产生影响。但从本研究实验结果可看出，溶血标本、不同储存时间和温度对HBV-DNA定量测定结果没有影响。在本试验中，可能是因为标本中的血红蛋白在煮沸后已变性沉淀，再经过离心，使标本的上清液中没有血红蛋白的存在，或是由于高速离心后去掉上层清液使得血红蛋白等干扰物质大量减少，因此溶血标本对HBV-DNA定量检测没有影响。 临床上由于乙肝病毒DNA（HBV-DNA）荧光定量PCR比较昂贵，标本较少，因此不能每天都进行检测，本研究证实标本不同储存时间和温度对HBV-DNA定量测定结果没有影响，对临床PCR检测有指导意义。 参考文献 [1] 郑建中，王丽萍. 标本因素对荧光定量PCR法测定乙肝病毒DNA的影响[J].中国医药指南，2008，6（17）：431-433. [2]马彩云.标本因素对HBV-DNA测定的影响[J].中外健康文摘，2011，8（42）：54-55. [3]郑建中，王青，王凤华，等.标本因素对荧光定量PCR法测定乙肝病毒DNA的影响[J].医学检验与临床，2008，19（5）：48，58-59. [4]宋春元.标本溶血对常规生化检验项目的影响[J].中国社区医师（医学专业），201