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小鼠β-actin基因的克隆
【摘要】 β-actin基因是肌动蛋白的一种，在各种细胞和组织当中，β-actin基因表达相对稳定【1】，且β-actin基因在核DNA中有多个拷贝，增加了核DNA的检测率【2】，在PCR当中常常被作为内参使用。本次实验通过对从小鼠肝脏中提取得到的RNA进行PT-PCR、扩增、克隆、筛选以及PCR鉴定和酶切鉴定等，获得纯度较好的β-actin基因，为以后的实验打下了基础。
【Abstract】 β-actin gene is a kind of actin，In all sorts of cells and tissues，β-actin gene express relatively stable【1】，and β-actin genes in nuclear DNA has multiple copies，increased nuclear DNA detection rate【2】，so that it is often used as the reference in PCR。This experiment by making PT-PCR, amplification, clone, filter, and PCR identification and endonuclease identification, etc.of RNA,which is extracted from the livers of the mice , gets the good purity of β-actin genes, lay the foundation of the later experiment.
【关键词】RT-PCR，克隆，酶切
目录
1、前言…………………………………………………..2
2、实验仪器、试剂与材料……………………………..3
2.1实验仪器…………………………………………………..3
2.2试剂与材料………………………………………………...3
3、方法与结果分析……………………………………..4
3.1小鼠肝脏总RNA提取……………………………………4
3.1.1 实验步骤……………………………………………………4
3.2 RT－PCR、扩增产物纯化与琼脂糖凝胶电泳鉴定…5
3.2.1 实验步骤…………………………………………………….5
3.2.2结果分析.....................................................................................5
3.3 RT-PCR产物克隆……………………………………………….6
3.3.1 实验步骤………………………………………………………6
3.3.2结果分析.......................................................................................6
3.4转化子的筛选及PCR鉴定………………………………….8
3.4.1 实验步骤………………………………………………………8
3.4.2结果分析........................................................................................9
3.5重组质粒提取与酶切鉴定………………………………………..10
3.5.1 实验步骤………………………………………………………
3.5.2结果分析......
4、结论..........................................12
参考文献.........................................13
1、前言
β-actin在不同长生条件和不同生长阶段稳定表达，因而常作为一种内参基因被广泛使用，对于β-actin基因的研究也有很多的实验【3】，然而纸上得来终觉浅，觉知此事要鞠行，正所谓实践出真知，通过这次小鼠β-actin基因的克隆的实验，我们不仅了解到了β-actin基因的作用，同时实验操作能力大大增强，更重要的是，我们获得了独立思考的能力和懂得了团队合作精神的重要性。这正是我们开展大实验的初衷。
2、实验仪器、试剂与材料
2.1实验仪器:
低温高速离心机（Anke TGL-16B，上海安亭科学仪器厂），组织研磨棒，DEPC水处理的EP管与枪头，移液器（0.5-10微升、10-200微升，100-1000微升的量程），一次性手套，眼科剪，眼科镊，止血钳，PCR仪(2720 Thermal Cycler，AB Applied Bi
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