标本因素及保存条件对HCV+RNA检测的影响.pdfVIP

· 228· 实验与检验医学2017年 4月第 35卷第 2期 ExoerimentalandLaboratoryMedicineAt)rJ2017Vo1．35No．2 · 质量控制 · 标本因素及保存条件对 HGVRNA检测的影响 庄养林 1I2，熊丽红2张鹏飞：，王芳z，陈丹 ，施桥发 (1、南昌大学医学院，江西 南昌330006；2、江西省血液中心，江西 南昌330077；3、江西省职业病防治研究院，江西 南昌330006) 摘要：目的 探讨溶血、脂肪血、保存温度和保存时间对 HCVRNA检测的影响，确认用于核酸检测的标本正确采集、处 理及保存的关键控制点 方法 应用实时荧光PCR法，采用混样检测+单检的检测模式，对在不同浓度的血红蛋 白或甘油三 脂下 以及在不同温度条件下保存不同时间后的HCVRNA标本进行检测 ，对检测 的Ct值进行分析 。结果 小于 7．93mmol／L 的不 同浓度甘油三脂对 HCVRNA检测没有影响 (P0．05)，血红蛋 白浓度为 97g／L、34g／L、17gL／以及 8g／L时 ，其对 HCVRNA 检测均有影响(PO．05)，当血红蛋 白浓度小于 5g，L时，其对 HCVRNA检测均无影响 (P0．05)；保存温度在一3O℃下 4周 内， 其检测 Ct值差异均无统计学意义(PO．05)。在低于 37℃条件下，4h内保存 的HCVRNA标本检测 Ct值差异均无统计学意 义 (PO．05) 在 4cc的条件下保存 72h内．HCVRNA标本检测 Ct值差异无统计学意义 (P0．05)，25cc的条件下能保存 48h (P0．05)。结论 甘油三脂浓度小于7．93mmol／L对 HCVRNA的检测没有影响，血红蛋 白浓度大于 8g／L时会影响HCVRNA 的检测 ．用于 HCVRNA检测的标本在4℃保存时最好在 72h内完成检测 。 关键词：核酸检测技术；Ct值；溶血 ；脂肪血；保存条件 中图分类号：Q522．R512．91 文献标识码 ：A 文章编号：1674—1129(2017)02—0228—03 DoI：10．39690．issn．1674—1129．2017．02．028 核酸检测 (nucleicacidtest．NAT)技术 因其灵 2016年 9月 30日江西省血液 中心献血者经血清 敏度高 ．其缩短病毒检测的 “窗 口期 ”远大于血清 学检测 HBsAg、抗一HCV、抗一HIV均为 阴性以及 学方法 ．我国采供血机构 已将血液部分或全部进 NAT检测均为阴性的透亮血浆标本 收集上述时 行核酸检测。然而在核酸检测工作 中．标本的质 间段 内的HCVRNA检测阳性的血浆 ．制备 12～3O 量，如标本的溶血、脂肪血等因素及运输、保存条 倍检出限(LOD)浓度 的HCVRNA标本 ．分别放置 件如何会直接关系到检测结果的准确性 。国外较 于 4cI二、25cI=、37cI=、一3O℃环境下进行保存 (各 5 早的研究表明．血红蛋 白可通过其卟啉环与Taq 份)，4h、ld、2d、3d、l周 、4周后对所有标本进行 酶 的不可逆结合而抑制 Taq酶活性 ，从而影响 NAT检测 (其 中37℃组考虑到细菌污染等问题保 PCR测定 ”【。此外 ．检测标本 中的核酸降解 同样也 存 4周不纳入研究)。 是影响核酸检测 的重要因素 。细胞破碎时，RNA酶 收集上述时间段 内血清学及 NAT检测均为 阴 释放 出来则会降解 RNA。影响检测的灵敏度 。国外 性的严重乳糜血浆、红细胞悬液。将收集的红细胞 有报道 ．受标本保存方式 的影响．可使病毒核酸检 悬液放置一80 制成全溶血样本 ．经 3000g．15min 测结果 的阳性率偏低 ．因此 ．如果标本 的采集 、处 离心 ．取上层液体 ．加入血清学及 NAT检测均为阴 理 、保存不当．就会造成病毒核酸 的降解 ，进而影 性的透亮血浆标本分别制成倍 比稀释的溶血样本 响NAT检测本身的灵敏度 ．造成检测结果不准确， (1：1至 1：32稀释共 6组溶血样本)。将收